ZeptoMetrix 0801223说明书

Goat IgG ELISA预期用途
免疫-TEK山羊IgG酶联免疫吸附测定试剂盒是一种快速、易用的酶联免疫吸附测定试剂盒。*
设计用于
山羊初乳、牛奶、血清、血浆或其他生物液中山羊IgG的测定该分析包含可供使用的
试剂和执行时间不到两小时。试剂盒中的微孔板和检测抗体
特别平衡，与山羊IgG的所有亚类反应均匀。
*仅用于研究目的。不用于体外诊断。
测试原理
微孔板威尔斯涂覆多克隆抗体山羊IgG形成捕获阶段的测定。这些抗体结合在一起
均匀地对山羊IgG的所有亚类。捕获的山羊IgG与检测抗体反应，检测抗体是一种多克隆的抗山羊抗体。
与辣根过氧化物酶结合。该试剂也与山羊IgG的所有亚类反应均匀。酶
然后用四甲基联苯胺作为底物来定量井内的活性。
试剂
供应材料：
微孔板（1X96孔）：涂有纯化兔抗山羊IgG的条带
检测抗体（12 ml）：含有共轭兔抗山羊IgG过氧化物酶
山羊IgG标准品（7毫升）：含有山羊IgG和分析稀释剂
分析稀释液（100 ml）：含有PBS、Triton X-100®
和2-氯乙酰胺
平板清洗缓冲液（125毫升）：含有PBS，Tween 20？
和2-氯乙酰胺
基质（12 ml）：含有四甲基联苯胺（TMB）
停止溶液（12 ml）：专有技术配方
微孔板封闭剂（1 pk）：每包10个封闭剂
塑料袋（1袋）：用于存放未使用的微孔板条。
？Triton X-100是陶氏化学公司的注册商标。
Tween 20是ICI Americas，Inc.的注册商标。

所需但未提供的材料：
个人防护设备（一次性手套、实验室外套、安全眼镜等）
蒸馏水或去离子水
量筒和烧杯
准备样品和IGG标准稀释液的试管和试管架
经验证的可调节微量移液管和，单通道和/或多通道
计时器
在18-25摄氏度下验证的培养箱或温控室
吸水纸巾
有效测量450nm光密度的微板阅读器
自动微孔板清洗机或手动真空吸尘设备
绘图纸或计算机绘图软件

存储
在2-8°C下储存所有试剂盒。不要冷冻。未使用过的微孔板条应保存在密封袋中，并使用干燥剂
尽量减少受潮。所有储存和正确处理的试剂至少在打印的有效期之前是稳定的。
工具箱标签。
注意事项
在进行分析之前，仔细阅读所有说明。
处理套件组件和试样时，应采取通用预防措施。**
为避免交叉污染，对每个样品使用单独的移液管。
当测试潜在感染性样本时，遵守所有适用的地方、州和联邦法规
生物危险品的处置。
停止溶液含有盐酸，可能导致严重烧伤。如果接触到眼睛或皮肤，请冲洗
立即用水并寻求医疗救助。穿防护服和护目镜。
**MMWR，1988年6月24日，第37卷，第24号，第377-382、387-388页。
试剂的制备
洗板缓冲器
使用前，在蒸馏水或去离子水中稀释10倍1:10的洗板缓冲液。充分混合。准备1X洗板缓冲液
可在2-8℃下储存一周。如有以下情况，可订购额外的10x洗板缓冲液（ZMC目录：0801060）
需要。
山羊IgG标准曲线：
在6个试管上贴上标签，如下所示。山羊IgG标准（125 ng/ml）应在分析稀释剂中稀释，以制备
标准曲线如下表所示。

样品稀释：
山羊血清通常含有20毫克/毫升的IgG抗体。测定稀释液中山羊血清的1:2500～30万稀释度
建议进行初始测试。为了减少稀释误差，建议采用三个稀释步骤。例如，三个1:65折叠
连续稀释，其中10μl添加到640μl分析稀释剂中，是一种方便的稀释方案。
终用户必须估计来自其他生物流体的山羊IgG浓度，以便进行适当的稀释。
样品测试前。初次试验后，可能需要调整样品的稀释度，以获得
IgG浓度介于125 ng/ml和7.8 ng/ml之间，用于定量。
试验程序
使用前让所有试剂达到室温。如上所述制备试剂。将要使用的试管贴上标签
用于制备标准品和样品。如果整个微孔板不用于测试，去除多余的
从板架上剥开并用干燥剂放入可密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下储存。
步骤1：在其端部凸耳上标记每个板条，以确保板条在
化验。
第2步：用移液管将200μl标准1-6移到重复的孔中。
第3步：用移液管将每个样品200μl移到重复孔中。
第四步：用封板器盖住微孔板，在室温（18-25摄氏度）下培养30分钟。
第5步：抽取每口井的内容物，用1X洗板缓冲液清洗4次（见试剂制备）
部分）。冲洗时，用至少300μl的1X洗板缓冲液填充井内，然后抽吸。执行4个加注/吸气循环。
在后一次清洗循环后，小心地敲击吸水纸巾垫，*吸干盘子。继续
敲击直到没有观察到明显的洗板缓冲液滴。
第6步：用移液管将100μL山羊IgG检测抗体移到每个孔中。
第七步：用封板器盖上封板，在室温（18-25摄氏度）下孵育30分钟。
步骤8：如步骤5所述，用1X洗板缓冲液清洗板4次。
第9步：用移液管将100μl基质移入每个孔中。
步骤10：在室温（18-25摄氏度）下培养皿30分钟，不带盖子。蓝色会在
含有山羊IgG的井。
第11步：移液管100 L L进入每个井。从蓝色到黄色会发生颜色变化。轻轻敲打微板
混合。
步骤12：在15分钟内，使用微板读数读取每孔450 nm的光密度。

预期结果
下面是一个标准曲线的示例，不应用于计算实际样本。可以观察到变化
从实验室到实验室，由于移液器、培养箱温度、平板读取器等。

计算结果
测试有效性：
0 ng/ml标准的平均光密度必须低于0.200。
125 ng/ml的平均光密度必须高于1.000。
当平均光学浓度为
密度值不在标准曲线内。
计算：
1。计算每组标准和稀释样品的平均光密度（OD）值。
2。使用线性图纸或绘图软件，在Y轴上绘制每个标准的平均OD值与
X轴上相应的标准浓度。

三。通过这些点绘制适合拟合曲线以构建标准曲线。点对点的构造将是
准确。
第四章。用标准曲线插值法测定各稀释样品的IgG浓度。
5.乘以用于稀释每个样品的稀释系数，以确定原始样品的IgG浓度。
样本。
故障排除