myPOLS Biotec正在开发新一代的DNA聚合酶
用于和可靠的应用，例如个性化医疗，病原体检测，DNA和RNA诊断，法医学等等。
我们的研发活动包括：
- 改进的DNA聚合酶用于SNP检测和甲基化特异性PCR。
- 病原体检测分析，例如用于流感和诺如病毒诊断。
- 具有逆转录酶活性的热稳定DNA聚合酶。
- 抑制剂抗性聚合酶，用于从样品中直接PCR，如全血，唾液，细菌，细胞 – 颗粒，植物等。
后但并非不重要：我们所有的酶和混合物都是在康斯坦茨内部生产的，并经过常规测试，符合高质量标准。
myPOLS Biotec是一家来自康斯坦茨大学的生物技术公司，来自Andreas Marx教授的研究小组。凭借我们在高通量DNA聚合酶设计方面的专业知识，我们为您的应用定制酶。
Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix
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6101S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix |
100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
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＃6101M |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix |
500次反应á25μl 5 x 1.25毫升 |
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＃6201S |
Volcano3G RT-PCR探针2x Master Mix（+ ROX） |
100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
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＃6301S |
Volcano3G RT-PCR探针2x Master Mix（+ GreenDye） |
100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
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＃6401S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix（+ GreenDye，+ ROX） |
100次反应á25μl 1 x 1.25毫升 |
包含所有必需的组分，包括dNTP和优化的反应缓冲液，可在所有标准PCR循环仪中实现成功可靠的实时qPCR和RT-qPCR。包含的酶由我们的*表现，热启动配方，工程Taq DNA聚合酶和Volcano3G DNA聚合酶的混合物组成。该混合物被设计成适合多重PCR，病原体检测qPCR和各种基于探针的DNA和RNA靶标的qPCR。
包含的Volcano3G DNA聚合酶是一种工程化的，极其热稳定的逆转录酶和组合的DNA聚合酶，通过定向的人工进化获得。基于适体的DNA聚合酶的热启动制剂防止错误扩增。高于50°-55°C的温度会使适体的二级结构熔化并使聚合酶释放。
应用
- 快速检测和鉴定RNA和DNA靶标
- 逆转录qPCRs（RT-qPCRs）
- qPCRs（DNA或RNA目标）
- 多重PCR
- 实时PCR
- 基于探针的PCR
- 病原体检测
- 入门扩展
- 终点PCR
- 筛选/高通量PCR
- SELEX
典型的RT-PCR方案
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步 |
温度 |
时间 |
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初始变性步骤 |
80℃下 |
60秒 |
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逆转录步骤* |
50℃下 |
600秒 |
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PCR循环： |
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变性 |
95℃ |
10秒 |
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退火/延伸** |
各种* |
50秒（35-50周期） |
可以使用两步法和三步法PCR方案。
* = Volcano3G DNA聚合酶允许直接来自RNA模板的“零步”RT-PCR（没有等温逆转录步骤），因为逆转录也在循环PCR延伸步骤期间与DNA扩增同时发生。因此，逆转录步骤是任选的，并且在某些情况下可以省略。
** =通过运行温度梯度理想地建立新的RT-PCR，以便找到每个引物对的*逆转录/退火/延伸温度。引物的退火温度受其核酸序列和反应缓冲液组成（盐和pH）的强烈影响。
通常，Volcano3G DNA聚合酶是*热稳定的，并且在55-95°C之间活跃。
反应设置
使用的实验建议：
在退火/延伸步骤中使用温度梯度进行PCR，以找到测定的宜温度。
大多数RT-PCR分析在短时间80℃（1分钟）变性步骤和50-55℃（10分钟）的逆转录步骤以及标准PCR循环条件下都能很好地起作用。
建议的反应设置
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零件 |
卷 |
终浓度 |
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引物前移（10μM） |
1.0μl |
500 nM（50-1000 nM） |
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引物反向（10μM） |
1.0μl |
500 nM（50-1000 nM） |
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探针（10μM） |
xμl |
50 – 1000 nM |
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Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix |
10μl |
1X |
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模板/样品提取物* |
yμl |
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不含核酸酶的水 |
总反应体积高达20μl |
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* =推荐的模板浓度在0.004ng /μl-0.1μg/μl（总RNA或基因组DNA）之间。
在使用前仔细旋转并混合所有溶液。
质量控制
RT-PCR活性：测试Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在实时PCR循环仪中从人总RNA提取物扩增151bp片段（HPRT1 mRNA），并将其显示为单个扩增产物。
DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物监测Volcano3G DNA聚合酶活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
酶浓度通过蛋白质特异性染色确定。有关批次特定浓度，请通过info@mypols.de查询更多信息。
存储
本产品采用冷藏包装。请在抵达-20°C时存放产品。
通过以等分试样存储来小化冻融循环的次数。对于日常使用，我们建议将等分试样保持在4°C。
Volcano3G是否具有RNAse-H样活性？
Volcano3G来自Taq DNA聚合酶，因此它没有任何RNase-H活性。在循环PCR延伸步骤期间，逆转录与DNA扩增同时发生。
然而，Volcano3G具有核酸酶结构域作为Taq野生型酶，可用于基于水解的实时PCR。
我怎样才能将扩增限制在mRNA靶标上？
我只获得引物二聚体。如何建立我的RT-PCR？
我可以用Volcano逆转录长RNA链（> 500 bp）吗？
我在琼脂糖凝胶上看到一个低分子带 – 这是Volcano3G RT PCR Mix的污染吗？
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货号 |
品名 |
规格 |
品牌 |
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8100S |
Volcano2G DNA聚合酶 |
250 U，5U /μl，50μl |
mypols |
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8100M |
Volcano2G DNA聚合酶 |
1000U，5U /μl，200μl |
mypols |
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6101S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
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6101M |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix |
500 reactions á 25 µl |
mypols |
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5 x 1.25 ml |
mypols |
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6201S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX) |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
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6301S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye) |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
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6401S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX) |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
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上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商
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