myPOLS Biotec是一家来自康斯坦茨大学的生物技术公司，来自Andreas Marx教授的研究小组。凭借我们在高通量DNA聚合酶设计方面的专业知识，我们为您的应用定制酶。
myPOLS Biotec正在开发新一代的DNA聚合酶
用于和可靠的应用，例如个性化医疗，病原体检测，DNA和RNA诊断，法医学等等。
我们的研发活动包括：
- 改进的DNA聚合酶用于SNP检测和甲基化特异性PCR。
- 病原体检测分析，例如用于流感和诺如病毒诊断。
- 具有逆转录酶活性的热稳定DNA聚合酶。
- 抑制剂抗性聚合酶，用于从样品中直接PCR，如全血，唾液，细菌，细胞 – 颗粒，植物等。
后但并非不重要：我们所有的酶和混合物都是在康斯坦茨内部生产的，并经过常规测试，符合高质量标准。
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix
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Article |
Product |
Size |
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#7101S |
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) |
100 reactions à 25 µl, 1 x 1.25 ml |
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#7101M |
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) |
500 reactions à 25 µl, 5 x 1.25 ml |
该混合物专门针对直接从电池应用进行了优化。
省略耗时且昂贵的RNA纯化。VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix使您能够直接从细胞悬液或细胞裂解液中定量和检测RNA，无需纯化步骤。只需将细胞分离，将细胞悬浮液直接添加到RT-PCR反应混合物中，放入实时仪器中，然后启动。
任选地，使用裂解缓冲液直接在孔或烧瓶中裂解细胞，简单地旋转并将上清液直接加入到RT-PCR混合物中。 – 准备好了。
裂解物也可以冷冻并储存在-20℃。
应用
- 使用引物/探针或实时PCR染料直接从细胞RNA检测和定量
- 每个样品100-10.000个细胞的基因表达分析。
- 适用于多种细胞类型
VolcanoCell2G可以直接从细胞中进行灵敏的RNA检测：
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一个） |
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b） |
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图1. 直接来自细胞RT-qPCR的0步骤 a）直接来自细胞RT-qPCR的0步骤的工作流程比2步骤标准RT-qPCR更容易和更快。b）从Lund人中脑（LUHMES）细胞中检测到GAPDH mRNA，其根据VolcanoCell2G方案（包括单独的裂解缓冲液）重悬浮。 |
反应设置
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零件 |
卷 |
终浓度 |
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VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix |
12.5μl |
1X |
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引物前移（10μM）* |
1μl |
0.4μM（0.05-1μM） |
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引物反向（10μM）* |
1μl |
0.4μM（0.05-1μM） |
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探针（10μM） |
1μl |
0.4μM（0.05-1μM） |
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模板**： 细胞悬浮液（无核酸酶水）*** 要么 细胞裂解液（在1x裂解缓冲液中）*** |
1 – 9.5μl2.5μl |
<10.000个细胞/反应 <10.000个细胞/反应 |
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不含核酸酶的水 |
总反应体积高达25μl |
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将所有组件保存在冰上。
在使用前仔细旋转并混合所有溶液。
*请注意，Volcano RT-PCR混合物是从DNA和RNA模板扩增的，因此必须使用仅与外显子 – 外显子连接结合的RNA选择性引物。
**建议的细胞数是悬浮在无核酸酶水或1x VolcanoCell2G裂解缓冲液中的10-10,000个细胞。细胞悬浮液应按照随附手册的“方法”部分的建议进行新鲜制备。
***细胞培养的模板可直接通过在无核酸酶水中稀释细胞沉淀（产品手册的METHODS部分中的方案1）或通过用1x VolcanoCell2G裂解缓冲液裂解孔或管中的细胞来制备（方案2）在产品手册的METHODS部分中，当需要从不同的孔（例如：在微量滴定板上）制备RT-PCR反应时，这对于高通量测定可能更有用。
典型的0步RT-PCR方案（不需要等温逆转录步骤）
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步 |
温度 |
时间 |
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初始变性 |
95℃ |
3分钟 |
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变性 |
95℃ |
15秒 |
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退火/延伸* |
55-75℃下 |
60秒（25-40周期） |
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保持 |
<10℃ |
保持 |
*通常，退火温度比所用引物的计算熔融温度低约3-5℃。通过运行温度梯度理想地建立新的PCR，以便找到每个引物对的宜退火/延伸温度。还可以应用三步协议，具有单独的退火和延伸步骤。
详细的产品说明
该试剂盒包含一种工程化，极热稳定的逆转录酶和组合的DNA聚合酶，包括一个特别优化的缓冲系统，只需要少量细胞（100到10,000个细胞）。套件中还包含单独的裂解缓冲液。
所包含的Volcano2G DNA聚合酶通过多代定向人工进化而设计，并且在95℃下的半衰期> 40分钟。它直接从细胞悬浮液或裂解物中促进“零步”RT-PCR，无需等温逆转录步骤。
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix包含所有标准实时循环仪器中成功可靠的RT-PCR所需的所有组分，并且与常见的RT-PCR检测方法兼容，如荧光实时PCR染料或荧光探针。
推荐的扩增子大小应在60-300 bp之间。
请注意，必须使用跨越外显子 – 外显子连接的引物，以限制仅对mRNA靶标的扩增。
通过避免昂贵，耗时的细胞裂解或RNA纯化，VolcanoCell试剂盒是高通量应用，RNAi敲除或基因表达实验的理想选择。预先准备好的2x混合物可确保可重复的RT-PCR结果，显着缩短设置时间和移液错误的风险。只需添加引物和模板。用包含的裂解缓冲液可以容易地制备细胞裂解物。但是，扩增子的大小宜在60-300 bp之间！
产品的成分/含量
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix含有工程DNA聚合酶，在具有dNTP的应用优化缓冲系统中具有逆转录活性。还包括单独的裂解缓冲液。
质量控制
RT-PCR活性：测试VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix的成功RT-PCR性能。在实时PCR循环仪中从人总RNA提取物扩增151bp片段（HPRT1 mRNA），并将其显示为单一扩增产物。
DNA聚合酶活性：已经使用人工DNA模板和DNA引物监测Volcano2G聚合酶活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
通过蛋白质特异性染色确定酶浓度。有关批次特定浓度，请通过info@mypols.de查询更多信息。
存储
本产品采用冷藏包装。请在抵达-20°C时存放产品。通过以等分试样存储来小化冻融循环的次数。对于日常使用，我们建议将等分试样保持在4°C。
参考
Chovancova，P.，Merk，V.，Marx，A.，Leist，M.，Kranaster，R。（2017）反向转录定量PCR直接来自没有RNA提取且没有等温逆转录的细胞：'零步'RT-qPCR协议。Biol Methods Protoc（2017）2（1）：bpx008。doi：https：//doi.org/10.1093/biomethods/bpx008
Blatter，N.，Bergen，K.，Nolte，O.，Welte，W.，Diederichs，K.，Mayer，J.，Wieland，M。和Marx，A。（2013），RNA的结构和功能 – 阅读耐热DNA聚合酶。Angew。化学。诠释。Ed。，52：11935-11939。DOI：10.1002 / anie.20130665。
Kranaster，R.，Drum，M.，Engel，N.，Weidmann，M.，Hufert，FT和Marx，A。（2010），一步RNA病原体检测，具有逆转录酶活性的突变热稳定Thermus aquaticus DNA聚合酶。Biotechnology Journal，5：224-231。DOI：10.1002 / biot.200900200。
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货号 |
品名 |
规格 |
品牌 |
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8100S |
Volcano2G DNA聚合酶 |
250 U，5U /μl，50μl |
mypols |
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8100M |
Volcano2G DNA聚合酶 |
1000U，5U /μl，200μl |
mypols |
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6101S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
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6101M |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix |
500 reactions á 25 µl |
mypols |
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5 x 1.25 ml |
mypols |
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6201S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX) |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
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6301S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye) |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
||
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6401S |
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX) |
100 reactions á 25 µl |
mypols |
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1 x 1.25 ml |
mypols |
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7101S |
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) |
100 reactions à 25 µl, 1 x 1.25 ml |
mypols |
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7101M |
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) |
500 reactions à 25 µl, 5 x 1.25 ml |
mypols |
上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商
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