Cytoskeleton，Inc。很高兴为药物筛选，信号转导和细胞骨架研究提供广泛的试剂盒和产品。我们专注于生产纯化蛋白质和易于使用的试剂盒，以研究生物化学和细胞过程。我们的试剂盒可用于少量样品，用于基础研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量样品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我们现有的产品，我们还在产品线中为微管，微管蛋白，运动蛋白，小G蛋白效应物，GAP，GEF和其他几种蛋白提供药物筛选服务。
Cytoskeleton的Biochem Kits™是用于分析细胞骨架生物化学和信号转导的不同方面的综合试剂盒。这些工具包通常构成出版物中图形的基础，请查看引文标签中的示例。该试剂盒附带了分析所需的所有试剂以及如何使用它们的详细说明，因此您可以在准备好试剂盒后立即进行分析！
- 测量蛋白质和药物对肌动蛋白聚合/解聚的影响。
- 发现和表征肌动蛋白结合蛋白（ABPs）。
- 在细胞或组织裂解物中定量G-肌动蛋白（单体）对F-肌动蛋白（聚合物）。
- 将设置时间从几个月缩短到几天。
许多出版物引用了在论文的材料和方法部分中使用Cytoskeleton的试剂盒。通常，引文与图形或图像形式的特定结果相关联，这有助于您，作者，您的发现。这表明套件可在短时间内生成出版物质量数据，从而有助于提高工作效率。肌动蛋白试剂盒的引用示例如下所示。个别产品页面上提供了更多引文。
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肌动蛋白结合蛋白旋转分析Biochem试剂盒：兔骨骼肌肌动蛋白（Cat。＃BK001） |
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Takeshita，N.，Ohta，A。和Horiuchi，H。（2005）。CsmA是一种具有肌球蛋白运动样结构域的V类几丁质合酶，通过与构巢曲霉中肌动蛋白细胞骨架的直接相互作用进行定位。摩尔。生物学。细胞16,1961-1970。 |
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Banerjee，J。和Wedegaertner，PB（2004）。鉴定PDZ-RhoGEF中的新序列，其介导与肌动蛋白细胞骨架的相互作用。摩尔。生物学。Cell 15,1760-1775。 |
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Kumar，N.，Zhao，P.，Tomar，A.，Galea，CA和Khurana，S。（2004）。绒毛蛋白与磷脂酰肌醇4,5-二磷酸的结合调节肌动蛋白细胞骨架。J. Biol。化学。279,3096-3110。 |
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Torgler，CN，Narasimha，M.，Knox，AL，Zervas，CG，Vernon，MC和Brown，NH（2004）。Tensin稳定果蝇中的整合素粘合剂接触。开发。Cell 6,357-369。 |
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Oliver，CJ，Terry-Lorenzo，RT，Elliott，E.，Bloomer，WA，Li，S.，Brautigan，DL，Colbran，RJ和Shenolikar，S。（2002）。将蛋白磷酸酶1（PP1）靶向肌动蛋白细胞骨架：neurabin I / PP1复合物调节细胞形态。摩尔。细胞。生物学。22,4690-4701。 |
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Hildebrand，JD和Soriano，P。（1999）。Shroom是一种含有PDZ结构域的肌动蛋白结合蛋白，是小鼠神经管形态发生所必需的。细胞99,485-497。 |
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肌动蛋白聚合生物化学试剂盒（荧光形式）：兔骨骼肌肌动蛋白（Cat。＃BK003） |
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Takamiya，R.，Takahashi，M.，Park，YS，Tawara，Y.，Fujiwara，N.，Miyamoto，Y.，Gu，J.，Suzuki，K。和Taniguchi，N。（2005）。神经母细胞瘤细胞中突变的Cu，Zn-SOD的过度表达导致细胞骨架改变。上午。J. Physiol。288，C253-259。 |
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Kumar，N.，Tomar，A.，Parrill，AL和Khurana，S。（2004）。功能性解剖和分子表征的钙敏感肌动蛋白封闭和肌动蛋白解聚位点在绒毛蛋白。J. Biol。化学。279,45036-45046。 |
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Fontao，L.，Geerts，D.，Kuikman，I.，Koster，J.，Kramer，D。和Sonnenberg，A。（2001）。plectin与肌动蛋白的相互作用：通过肌动蛋白结合结构域的二聚化肌动蛋白丝交联的证据。J. Cell Sci。114,2065-2076。 |
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Zhai，L.，Zhao，P.，Panebra，A.，Guerrerio，AL和Khurana，S。（2001）。绒毛蛋白的酪氨酸磷酸化调节肌动蛋白细胞骨架的组织。J. Biol。化学。276,36163-36167。 |
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Blader，IJ，Cope，MJ，Jackson，TR，Profit，AA，Greenwood，AF，Drubin，DG，Prestwich，GD和Theibert，AB（1999）。GCS1是酿酒酵母中的Arf鸟苷三磷酸酶活化蛋白，是体内正常肌动蛋白细胞骨架组织所必需的，并且在体外刺激肌动蛋白聚合。摩尔。生物学。Cell 10,581-596。 |
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肌动蛋白结合蛋白旋转分析Biochem试剂盒：人血小板肌动蛋白（Cat。＃BK013） |
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Gohla，A.，Birkenfeld，J。和Bokoch，GM（2005）。Chronophin是一种新型HAD型丝氨酸蛋白磷酸酶，可调节cofilin依赖性肌动蛋白动力学。纳特。细胞生物学。7,21-29。 |
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Falcon-Perez，JM，Starcevic，M.，Gautam，R。和Dell'Angelica，EC（2002）。BLOC-1，一种新的复合物，含有苍白素和弱蛋白，参与黑素体和血小板致密颗粒的生物发生。J. Biol。化学。277,28191-28199。 |
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Zhai，L.，Zhao，P.，Panebra，A.，Guerrerio，AL和Khurana，S。（2001）。绒毛蛋白的酪氨酸磷酸化调节肌动蛋白细胞骨架的组织。J. Biol。化学。276,36163-36167。 |
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Leung，CL，Sun，D.，Zheng，M.，Knowles，DR and Liem，RK（1999）。微管肌动蛋白交联因子（MACF）：dystonin和肌营养不良蛋白的杂合体，可与肌动蛋白和微管细胞骨架相互作用。J. Cell Biol。147,1275-1286。 |
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G-Actin / F-actin体内检测Biochem试剂盒（目录号BK037） |
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Rapier等，2010。癌细胞Int。10,24 |
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Rapier等。（2010年）。细胞外基质微观形成驱动结肠癌细胞中细胞运动性和Rho A活性的关键变化。癌细胞10,24。 |
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Meeks，MK，Ripley，ML，Jin，Z。和Rembold，CM（2005）。热休克蛋白20介导的力抑制毛喉素放松猪颈动脉。上午。J. Physiol。288，C633-639。 |
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Zhang，W.，Wu，Y.，Du，L.，Tang，DD and Gunst，SJ（2005）。通过N-WASp激活Arp2 / 3复合物是肌动蛋白聚合和平滑肌收缩所必需的。上午。J. Physiol。288，C1145-1160。 |
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Chen，G.，Raman，P.，Bhonagiri，P.，Strawbridge，AB，Pattar，GR和Elmendorf，JS（2004）。磷脂酰肌醇4,5-二磷酸对3T3-L1脂肪细胞持续暴露于胰岛素诱导的皮质丝状肌动蛋白丢失和胰岛素抵抗的保护作用。J. Biol。化学。279,39705-39709。 |
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Tang，DD和Gunst，SJ（2004）。小GTP酶Cdc42在平滑肌的收缩刺激期间调节肌动蛋白聚合和张力发展。J. Biol。化学。279,51722-51728。 |
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Searles CD，Ide L，Davis ME，Cai H，Weber M（2004）。肌动蛋白细胞骨架组织和细胞生长过程中内皮细胞一氧化氮合酶的转录后调节。Circulation Research 95,488-495。 |
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Tu，Y.，Wu，S.，Shi，X.，Chen，K。和Wu，C。（2003）。Migfilin和Mig-2将细丝蛋白和肌动蛋白细胞骨架的细胞粘连与细胞形状调节功能联系起来。细胞113,37-47。 |
问题1：哪种试剂盒是检测肌动蛋白结合蛋白的*选择？
答案1： Cytoskeleton有两个肌动蛋白结合蛋白旋转分析试剂盒，是识别和表征肌动蛋白结合蛋白的理想选择。一个试剂盒使用肌肉肌动蛋白（Cat。＃BK001），另一个试剂盒使用非肌肉肌动蛋白（Cat。＃BK013）。两种测定均利用共沉淀来鉴定蛋白质是否与单体或丝状肌动蛋白结合以及蛋白质是否具有F-肌动蛋白切断或成束特性。为了检查与肌动蛋白单体结合的化合物或蛋白质，含有链霉抗生物素蛋白包被的孔的96孔板可以与生物素化肌动蛋白复合（Cat。＃AB07）产生肌动蛋白单体捕获蛋白。然后可以将化合物，蛋白质或提取物与捕获蛋白一起温育，并且可以通过HRP检测系统使用针对目标化合物或蛋白质的抗体（或标记可以与测试蛋白缀合）来显现结合。请记住，缓冲液组成也很重要，因为它需要低盐（约50 mM）并含有CaCl 2（或其他二价阳离子）和ATP以维持肌动蛋白单体的稳定性。有关兼容缓冲液的示例，请参阅我们的一般肌动蛋白缓冲液配方（Cat。＃BSA01-001）。或者，可以用GST标记感兴趣的蛋白质（避免还原剂）并与板缀合，然后与生物素化的肌动蛋白一起温育，并用HRP缀合的链霉抗生物素蛋白显现。
问题2：当我对感兴趣的肌动蛋白没有可用的芘结合物（例如心脏，平滑肌或细胞质肌动蛋白）时，如何用芘测定法测量肌动蛋白聚合？
答案2： 为了检查未标记肌动蛋白的聚合，请点击此处查看使用过量未标记肌动蛋白（心肌，平滑肌或细胞质）加10％芘标记肌肉肌动蛋白的聚合方案。芘肌肉肌动蛋白不会以该测定中使用的浓度自身聚合，因此反应依赖于未标记的非肌肉肌动蛋白形成F-肌动蛋白。以这种方式，芘标记的肌肉肌动蛋白被吸收并聚合以充当用于聚合未标记的肌动蛋白的报道分子，其以更高的浓度存在。
问题3：如何从细胞或组织提取物中测量G-和F-肌动蛋白？
答案3： 确定细胞或组织样本中游离球状肌动蛋白（G-肌动蛋白）含量与丝状肌动蛋白（F-肌动蛋白）含量的可重复和准确的方法是使用F-肌动蛋白和G-肌动蛋白部分的Western印迹定量。 。一般方法是使F-肌动蛋白稳定缓冲液中的细胞或组织均质化，然后高速离心以将F-肌动蛋白与G-肌动蛋白池分离。然后通过SDS-PAGE分离级分，并通过Western印迹定量肌动蛋白。终结果给出了准确的方法来确定掺入细胞骨架的F-肌动蛋白与细胞质中发现的G-肌动蛋白的比例。细胞骨架提供了一种简单易用的选择，可用G-肌动蛋白/ F-肌动蛋白体内检测试剂盒（Cat。＃BK037）定量G-和F-肌动蛋白。该试剂盒提供了在不同处理条件下定量细胞或组织样品中单体和聚合肌动蛋白水平的所有必需试剂。将样品离心，然后将沉淀（F-肌动蛋白）和上清液（G-肌动蛋白）溶解于SDS上样缓冲液中并通过Western印迹处理。
购
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G-Actin/F-actin In Vivo Assay Biochem Kit
30-100 assays (Cat. # BK037)
窗体底端
产品用途包括
- 研究药物化合物对G-肌动蛋白与F-肌动蛋白比例的影响。
- 研究突变细胞系与其亲本细胞系对G-肌动蛋白与F-肌动蛋白比例变化的影响。
- 研究环境物理改变对G-肌动蛋白与F-肌动蛋白比例的影响。
引言
确定细胞群中丝状肌动蛋白（F-肌动蛋白）含量与游离球状肌动蛋白（G-肌动蛋白）含量的可重复和准确的方法是使用F-actin和G-actin细胞的Western印迹定量分数（1-4）。一般方法是使F-肌动蛋白稳定缓冲液中的细胞均质化，然后离心以将F-肌动蛋白与G-肌动蛋白池分离。然后通过SDS-PAGE分离级分，并通过Western印迹定量肌动蛋白。终结果给出了准确的方法来确定掺入细胞骨架的F-肌动蛋白与细胞质中发现的G-肌动蛋白的比例。该试剂盒包含进行该试验所需的所有试剂。
试剂盒内容
该试剂盒包含足够的材料，可根据分析设置进行30-100次分析，并包含阳性和阴性对照试剂。包括以下组件：
- 裂解和F-肌动蛋白稳定缓冲液
- ATP（Cat。＃BSA04）
- 蛋白酶抑制剂鸡尾酒（Cat。＃PIC02）
- F-肌动蛋白增强对照溶液
- F-肌动蛋白解聚对照溶液
- 控制G-actin标准品（目录号＃AKL99）
- 肌动蛋白多克隆抗体（Cat。＃AAN01）
- SDS样品缓冲液（5 x）
- DMSO
- 手册详细的协议和广泛的故障排除指南
需要的设备
- 离心机能够以100,000xg的温度控制操作，体积为100μl至2ml，取决于细胞裂解体积
- SDS-PAGE小凝胶系统和western印迹转移装置
实施例结果
使用G-肌动蛋白/ F-肌动蛋白体内测定试剂盒，在用肌动蛋白聚合药物jasplakinolide处理的Swiss 3T3细胞中研究了G-肌动蛋白和F-肌动蛋白量的变化。在未经处理的瑞士3T3细胞中，80％的肌动蛋白是可溶性G-肌动蛋白，并且在上清液部分中发现，20％的肌动蛋白是丝状F-肌动蛋白并且在沉淀部分中发现。在用jasplakinolide处理的Swiss 3T3细胞中，80％的肌动蛋白重组成F-肌动蛋白并且在沉淀部分中发现（图1）。
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图1.用jasplakinolide处理后瑞士3T3细胞中肌动蛋白的重组。瑞士3T3细胞用jasplakinolide（Jaspl）处理或不处理（Untr），并使用BK037测定G-肌动蛋白（G）和F-肌动蛋白（F）含量。用jasplakinolide治疗导致F-肌动蛋白的有效积累。 |
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问题1：在哪个步骤可以停止检测？
答案1： 直到在37℃下旋转100,000xg 1小时后才能停止测定。在高速离心后，可将上清液（G-肌动蛋白）与SDS上样缓冲液混合并冷冻备用。应使用解聚剂和水重悬沉淀（F-肌动蛋白），然后与SDS上样缓冲液混合并冷冻备用。在冷冻时，F-肌动蛋白解聚，因此在冷冻样品之前必须将F-肌动蛋白与G-肌动蛋白分离以分离样品以准确测量F-肌动蛋白和G-肌动蛋白比率。
问题2：这种检测有多敏感？
答案2： 该检测方法可以检测到G-肌动蛋白与F-肌动蛋白比例的15％变化。每个条件应一式两份进行并重复几次，因为实验之间的测定再现性可以变化10-20％。
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参考
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货号 |
品名 |
规格 |
品牌 |
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BK165-S |
Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit |
(10 assay) |
cytoskeleton |
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BK165 |
Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit |
(30 assay) |
cytoskeleton |
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BK163-S |
Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit |
(10 assay) |
cytoskeleton |
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BK163 |
Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit |
(30 assay) |
cytoskeleton |
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BK160-S |
Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit |
(10 assay) |
cytoskeleton |
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BK160 |
Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit |
(30 assay) |
cytoskeleton |
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BK162-S |
Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit |
(10 assay) |
cytoskeleton |
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BK162 |
Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit |
(30 assay) |
cytoskeleton |
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BK161-S |
Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit |
(10 assay) |
cytoskeleton |
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BK161 |
Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit |
(30 assay) |
cytoskeleton |
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AAC04-Beads |
Acetyl-Lysine Affinity Beads |
ea |
cytoskeleton |
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APY03-Beads |
Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads |
ea |
cytoskeleton |
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ASM11-Beads |
SUMOylation 1 Affinity Beads |
ea |
cytoskeleton |
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ASM24-Beads |
SUMOylation 2/3 Affinity Beads |
ea |
cytoskeleton |
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UBA01-Beads |
Ubiquitination Affinity Beads |
ea |
cytoskeleton |
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CIG02-Beads |
Acetyl-Lysine Control Beads |
ea |
cytoskeleton |
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CIG03-Beads |
SUMO1 IP Control Beads |
ea |
cytoskeleton |
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CIG01-Beads |
IgG Control Beads |
ea |
cytoskeleton |
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CUB02-Beads |
Ubiquitination Control Beads |
ea |
cytoskeleton |
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BLR01 |
BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit |
ea |
cytoskeleton |
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BLR02 |
BlastR™ Rapid Filtration Kit |
ea |
cytoskeleton |
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AAC02 |
Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) |
ea |
cytoskeleton |
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AAC03 |
Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) |
ea |
cytoskeleton |
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AAC03-HRP |
Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) |
ea |
cytoskeleton |
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AAC01 |
Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) |
ea |
cytoskeleton |
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APY03 |
Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) |
ea |
cytoskeleton |
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APY03-HRP |
Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) |
ea |
cytoskeleton |
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ASM01 |
SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) |
ea |
cytoskeleton |
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ASM24 |
SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) |
ea |
cytoskeleton |
|
ASM23 |
SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) |
ea |
cytoskeleton |
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ASM23-HRP |
SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) |
ea |
cytoskeleton |
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AUB01 |
Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal |
ea |
cytoskeleton |
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AUB01-HRP |
Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal |
ea |
cytoskeleton |
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PHDG1 |
Acti-stain 488 phalloidin |
ea |
cytoskeleton |
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PHDH1 |
Acti-stain 555 phalloidin |
ea |
cytoskeleton |
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PHDN1 |
Acti-stain 670 phalloidin |
ea |
cytoskeleton |
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BK001 |
Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin |
ea |
cytoskeleton |
|
BK003 |
Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin |
ea |
cytoskeleton |
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AKL95 |
Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle |
ea |
cytoskeleton |
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AD99 |
Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle |
ea |
cytoskeleton |
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AS99 |
Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle |
ea |
cytoskeleton |
|
AKL99 |
Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle |
ea |
cytoskeleton |
|
AKF99 |
Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle |
ea |
cytoskeleton |
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AP05 |
Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle |
ea |
cytoskeleton |
|
APHR |
Actin protein (rhodamine): human platelet |
ea |
cytoskeleton |
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AR05 |
Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle |
ea |
cytoskeleton |
|
AT01 |
Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle |
ea |
cytoskeleton |
|
RP01P |
Arp2/3 protein complex: porcine brain |
ea |
cytoskeleton |
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CS-TFC01 |
Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) |
ea |
cytoskeleton |
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CF01 |
Cofilin 1 protein: human recombinant |
ea |
cytoskeleton |
|
HPG6 |
Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant |
ea |
cytoskeleton |
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MH01 |
Heavy meromyosin protein |
ea |
cytoskeleton |
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CS-MH03 |
Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) |
ea |
cytoskeleton |
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CS-MYS03 |
Myosin – cardiac S1 fragment |
ea |
cytoskeleton |
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CS-MYS04 |
Myosin – skeletal muscle S1 fragment |
ea |
cytoskeleton |
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CS-MYS05 |
Myosin – smooth muscle S1 fragment |
ea |
cytoskeleton |
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MY02 |
Myosin II protein: rabbit skeletal muscle |
ea |
cytoskeleton |
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MY03 |
Myosin protein: bovine cardiac muscle |
ea |
cytoskeleton |
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PR02 |
Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant |
ea |
cytoskeleton |
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PHDR1 |
Rhodamine Phalloidin |
ea |
cytoskeleton |
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CY-SC001 |
SiR-Actin Kit |
ea |
cytoskeleton |
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CY-SC013 |
SiR700-Actin Kit |
ea |
cytoskeleton |
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VCG03 |
WASP protein VCA domain: GST tagged: human |
ea |
cytoskeleton |
上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商
1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。
2：产品种类齐全，经营超过700多品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。
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6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。
7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发，欢迎合作。