intronbio 25022说明书

i-Taq™ DNA Polymerase

i-Taq™DNA聚合酶

 

 

Cat.No	Capacity
25021	250 unit
25022	500 unit

 

产品信息

描述

高纯度i-Taq™PCR核心试剂盒，无论模板类型和反应条件如何，均可显示稳定，的DNA扩增

• •94 KDa热稳定DNA聚合酶
• •高纯度Taq DNA聚合酶
     – 去除大肠杆菌衍生的蛋白质和DNA，可作为PCR来源
• •适用于从克隆DNA到人类基因组DNA的DNA
• •缓冲液优化，以显示良聚合酶活性，无论模板类型或反应条件如何

i-Taq™DNA聚合酶是一种94kDa的热稳定DNA聚合酶，通过克隆Thermus aquaticus（菌株YT1）的聚合酶基因在大肠杆菌中表达。它去除了大肠杆菌来源的蛋白质和DNA，它可以作为PCR中的污染物，是稳定有效的DNA扩增产物。基因组DNA，cDNA等可以扩增至5Kb。PCR（聚合酶链反应）是通过特异性重复特定DNA位点的合成来扩增试管中所需DNA分子的方法。结果，可以使用非常少量的DNA合成大量的DNA。当然，它广泛用于基础生物学，医学和生物学领域。我们现在正在简单快捷地扩大其在法医，食品，环境卫生和动植物检验领域的使用范围。⁵⁸体外-10 倍。扩增的DNA可用于如下的各种实验。根据实验结果，可以应用各种医学研究。在开发该方法的早期，使用大肠杆菌DNA聚合物进行PCR，因此必须在每次变性时补充变性大肠杆菌的DNA聚合酶。然而，通过在PCR中使用从Thermus aquaticus分离的热稳定DNA聚合酶，我们不必每一步都做补充酶的麻烦任务。结果，PCR成为分子生物学*的方法。PCR具有一系列三个步骤并重复30至40次。

PCR的步是DNA的变性，通过加热分离两条DNA链。每个分离的DNA用作模板，变性温度取决于DNA中G + C的量和长度。PCR的第二步是退火。在此阶段，引物与模板DNA结合，退火温度是决定反应准确性的重要因素。如果温度太高，引物将与模板DNA结合得太弱。如果温度太低，可以扩增不需要的DNA，因为引物非特异性结合。PCR的第三步是延伸步骤。在这个阶段，耐热DNA聚合酶将从模板DNA产生新的DNA。i-Taq™DNA聚合酶除高纯度酶外，通过优化缓冲液组合物以显示良聚合酶活性，无论模板类型或模板的一半，都可以获得高度可重复的结果。由于用该酶扩增的大多数产物在3端具有碱基A，因此可以将PCR产物原样克隆到T载体中。它也可以通过用DNA聚合酶如Klenow DNA聚合酶或T4 DNA聚合酶填充它而将其磷酸化成平末端而克隆到平端载体中。

 

应用

• 01基因组DNA，cDNA扩增至5kb
• 02T / A克隆或平端克隆

 

套件内容

 

内容	250个单位	500个单位
i-Taq™DNA聚合酶（5U / ml）	250单位×1管	500单位×1管
10×PCR缓冲液（含20 mM MgCl2）	1毫升×1管	1毫升×1管
10×MgCl 2游离PCR缓冲液	1毫升×1管	1毫升×1管
10 mM dNTPs（2.5 mM /每个）	500μl×1管	1毫升×1管
25mM MgCl 22	1毫升×1管	1毫升×1管
手册	1 ea	1 ea

技术数据

灵敏度比较数据（与其他公司比较）

i-Taq TM DNA聚合酶与公司A，B相同功能的DNA聚合酶的灵敏度比较。在该实验中，通过浓缩稀释牛gDNA并用CSF引物扩增。

泳道M，100bp DNA标记; 泳道1,1ng gDNA; 泳道2,100pg gDNA; 泳道3,10pg gDNA; 泳道4,1 gg gDNA; 泳道5,100fg gDNA; 泳道N，阴性对照

批次稳定性数据

确认了每批i-Taq TM DNA聚合酶的灵敏度活性。从连续稀释的SNU-1 cDNA和λDNA中扩增GAPDH（575bp）和1Kb片段以确认灵敏度。使用1单位的i-Taq TM DNA聚合酶扩增总共20ml反应混合物，并通过琼脂糖凝胶电泳分析5ml。

泳道M，100bp DNA标记; 1 Kb DNA标记; 泳道N，阴性对照