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OpeRATOR^®

OpeRATOR^® 是一种 O-蛋白酶，所消化的O-糖基化蛋白在S/T糖基化位点的N端存在黏蛋白型O-糖基化。OpeRATOR要发挥酶促活性需要O-聚糖的存在。

 

该酶为冻干粉形式，不添加任何防腐剂，每瓶2000 units，用于消化2 mg的O-糖基化蛋白。该酶与2000 units的SialEXO配套使用，用于去除唾液酸。

 

 

◆详细信息

OpeRATOR是一种蛋白内切酶，可催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中O-聚糖的直接邻近处的肽键水解。本蛋白内切酶高度特异性地在O-聚糖N末端的丝氨酸或苏氨酸处消化蛋白质。OpeRATOR活性需要黏蛋白型O-聚糖，仅在N端连接聚糖的糖蛋白是不会被消化的。该酶对带有或不带有唾液酸的O-聚糖蛋白都具有活性，但在去除唾液酸的O-聚糖蛋白上活性更高。OpeRATOR可以与试剂配套的SialEXO（唾液酸酶）一起使用。

 

OpeRATOR来源于Akkermansia muciniphila，并在E. coli中表达。该酶含有His标签，分子量为42 kDa。 SialEXO来源于Akkermansia muciniphila，并在E. coli中表达。SialEXO中的酶也包含His-tag，这两种成分的分子量分别为43 kDa和66 kDa。

 

 

◆单位定义

与1单位SialEXO一起在20 mM Tris， pH 6.8中于37°C孵育2 h后，1单位该酶可消化≥90％的1 µg糖蛋白（TNFαR）。

 

 

◆试剂组成与储存

●　1管OpeRATOR酶（G1-OP1-020），在pH 7.6的TBS中冻干，未添加防腐剂。

●　1管SialEXO（G1-SM1-020），在pH 7.6的TBS中冻干，未添加防腐剂。

产品在室温下运输，收货后储存在-20℃。产品复溶后，可在4-8°C下稳定保存1个月。

 

 

◆主要特点

●　消化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白

●　反应时间：2小时至过夜（16-18小时）

●　使用SialEXO Desialylation^®（配套试剂）提高性能

●　O-糖基化丝氨酸和苏氨酸残基的N末端酶切

 

 

◆应用

●　O-联糖基化分析

●　O-聚糖谱

●　O-聚糖位点测定

●　用于O-糖基化蛋白的Middle-down方法

●　O-糖肽图谱

常见问题和支持

Q. 有没有已知的OpeRATOR抑制剂？

A. OpeRATOR是一种金属蛋白酶，因此对螯合剂（如EDTA）高度敏感。浓度> 5mM会完全抑制该酶。ZnCl₂也能

A. 够适度抑制OpeRATOR活性。

 

Q. OpeRATOR可以在简单的己糖或戊糖上使用吗？

A. 不行，该酶通过与己糖连接的内部GalNAc识别黏蛋白型糖基化。

 

Q. OpeRATOR是否可以完全消化连续的O-糖基化位点？

A. 在糖蛋白样品中，O-糖基化的相对丰度和位点占有率可能会发生很大变化，这将导致生成大小不同的肽。在某些

A. 情况下，这些肽包含一个以上的O-聚糖，即OpeRATOR不会消化每个分子中的每个位点。但是，漏切的消化位

A. 点因分子而异，汇总的数据将提供有关O-糖基化位点的有价值的信息。

 

Q. 酶是否要求样品处于天然折叠状态，或者变性处理会有所帮助吗？

A. 如果消化不充分，则可能是由于酶在空间上无法到达样品上的O-聚糖识别位点。在这种情况下，建议尝试以下方

A. 法：还原，变性，羧甲基化，更换缓冲液，然后用SialEXO和OpeRATOR消化。

 

Q. 有必要去除唾液酸吗？

A. 在存在唾液酸的情况下，OpeRATOR的活性显着降低。我们建议使用SialEXO去除唾液酸。如果不选择去除步

A. 骤，那么我们建议您尝试使用和不使用SialEXO进行消化，以评估对您的特定样品和要求的影响。

 

Q. OpeRATOR和SialEXO可以在同一反应中使用吗？

A. 是的，这些酶可以结合使用，并且可以用于去唾液酸和消化O-糖基化蛋白。