慢病毒纯化酶试剂盒Takara

发表于2024年7月28日由Amresco中国官网

慢病毒纯化
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	631246	Collection Rack L	Each	￥1,469
Clontech	631233	Lenti-X Maxi Purification Kit	2 Preps	￥3,130
Clontech	631234	Lenti-X Maxi Purification Kit	5 Preps	￥5,474
Clontech	631245	Lenti-X Maxi Purification Kit (with Rack)	Each	￥6,864

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慢病毒纯化

Lenti-X Maxi Purification Kit可从原始的培养上清液中纯化出高纯度和高产量的病毒。其基于重力流柱的实验操作，快速、简单、有效并且优于基于过滤器的纯化系统，后者会损坏易于损伤的慢病毒颗粒，从而降低产量。重力流柱会轻柔固定培养上清液中的病毒颗粒，未被结合的物质则会在洗涤步骤穿透柱子流出。

为什么要纯化慢病毒？ 慢病毒纯化能去除可能对转导实验产生不利影响的细胞污染物。原始的培养上清液中包含残留的质粒DNA，不明感染和转导抑制剂，细胞和血清蛋白质，以及具有高度免疫原性的病毒蛋白质、核酸和病毒片段。在使用慢病毒作用于敏感靶细胞或体内应用之前，有必要通过纯化慢病毒来去除这些污染物。

简便的操作流程。 我们的慢病毒纯化柱是即用型预装柱，只需将10X结合缓冲液加入到上清液样品（9-45 ml）中，然后再将混合物添加至纯化柱即可。样品和缓冲液借助重力穿过树脂，就像是基于纯化柱的质粒制备。在两次洗涤纯化柱的过程中，杂质被去除掉了，纯化后的慢病毒回收在3 ml洗脱缓冲液中。

防止假转导。 使用纯化后的慢病毒储液还可以防止假转导，因为在感染的过程中，原始病毒上清液中高水平重组蛋白质会被转移至靶细胞中。而靶细胞假转导会掩盖慢病毒转导所预期的de novo表达。

更高的产量和纯度。 温和的纯化程序是维持病毒感染性和产生60-80％优良慢病毒产量的关键所在。基于阴离子交换的膜系统回收率要低得多，通常低于20％。而与基于过滤器的系统相比，Lenti-X纯化柱获得的病毒纯度更高。事实上，纯化后的Lenti-X样品中可检测到的蛋白质含量很低，而基于过滤器纯化的病毒液则含有与病毒共同纯化出来的高水平外源蛋白质。

■ Overview

· 与其他纯化技术相比，获得的纯度和产量更高 · 浓缩病毒至多10倍 · 简便而温和的重力流操作流程 · 专用收集架可与试剂盒 (Code No. 631245)一同购买，也可单独购买 (Code No. 631246) · 实现更高效、更一致的慢病毒转导，收获更健康的靶细胞 · 有效去除转导抑制剂和细胞毒性污染物

■ 实验例

图1. 收集架L。组装后，这个收集架可安全牢固地容纳三根色谱柱（例如慢病毒纯化柱）和三根收集管（50 ml锥形管）。

图2. 使用Clontech慢病毒纯化试剂盒可获得高产量和高纯度。使用我们的高滴度慢病毒包装系统制备并纯化慢病毒。Panel A. 为了确定病毒产量，通过qRT-PCR（RNA拷贝数）或流式细胞仪/荧光（IFU）测定纯化前和纯化后的慢病毒滴度，展示数据为七组实验的平均值。Panel B. 使用Lenti-X或基于过滤器的纯化系统（Vendor M和Vendor S）制备等量的纯化后慢病毒（1×105 IFU）进行SDS-PAGE和银染。与其它两种基于过滤器系统所制备的样品相比，在相同IFU的情况下Lenti-X样品含有明显更少的污染蛋白质。

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