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| 10分钟定量慢病毒滴度测试— Lenti-X GoStix Plus |
Lenti-X GoStix Plus提供了一种快速、简便、有效的方法，可以在非常短的时间内检测包装细胞上清液中的慢病毒滴度。这种检测方法包括将20 μl上清液添加到GoStix cassette中，等10分钟以等待表明慢病毒p24蛋白质存在的条带出现。我们早期的GoStix提供的是定性检测结果，而升级后的Lenti-X GoStix Plus的检测结果可以使用智能手机免费app进行分析，可以通过该应用程序比较条带强度来量化慢病毒滴度。
Lenti-X GoStix app的定量检测结果（称为GoStix值或GV）可用于比较不同包装系统所产生的病毒量，其方式类似于ELISA方法，但比ELISA要更简便和快捷得多，可借助参考病毒计算出实际的IFU/ml。访问我们的FAQs页面，了解如何下载和使用智能手机app的相关信息。通过简便快速的慢病毒定量方式，Lenti-X GoStix Plus可以使您的转导实验方案差异更小化，确保每次实验可以达到更为一致的转导效果。
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| ■ Overview |
· 使用简单的智能手机app在10分钟内量化慢病毒滴度*
· 确定收集慢病毒上清液的理想时机
· 确保实验达到一致的转导效果
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*最初的Lenti-X GoStix（Code No. 631243和631244）不能使用智能手机app进行慢病毒定量，并且该产品在逐步淘汰过程中。库存销售完毕后，将不再销售这些产品。如果需要的话，Lenti-X GoStix Plus可以使用与原始Lenti-X GoStix相同的方式进行定性分析。
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| ■ 应用 |
· 确定慢病毒包装反应是成功的
· 比较不同包装系统所产生的病毒量
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| ■ 观看视频 |
Applying lentiviral supernatants
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了解如何将样品正确添加至Lenti-X GoStix Plus cassette。
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Calculating lentiviral titer
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了解如何使用智能手机免费app扫描Lenti-X GoStix Plus cassette。
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| ■ 实验例 |
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图1. 展示了慢病毒载体滴度测定的常用方法及其相关时间表（以小时为单位）。使用Lenti-X GoStix Plus进行滴度测定仅需要十分钟，其测定时间远远短于传统方法。Lenti-X GoStix Plus：一种基于侧向层析技术的检测方法，用于检测上清液中的慢病毒p24衣壳蛋白质。qRT-PCR：通过qRT-PCR方法定量病毒RNA基因组。ELISA：检测p24衣壳蛋白质的量。PCR：通过qPCR测定整合的DNA前病毒。IFU（FACS）：通过FACS分析RFP/GFP阳性细胞测定被感染靶细胞的百分比。IFU（筛选）：通过检测转导细胞群中抗药细胞克隆的数量来确定感染单位。
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图2. p24的产生，GoStix值和IFU/ml值都取决于收获病毒的时间。使用Lenti-X Single Shot按照制造商操作指导制备ZsGreen1慢病毒一式两份，并在指定时间收集病毒。在每个时间点，使用Lenti-X GoStix Plus分析样品的GV值，使用HT1080细胞测定病毒稀释液确定IFU/ml。检测结果除了表明GV（i.e., p24积累）和IFU/ml取决于收获时间之外，这些数据还表明GV和IFU/ml之间的比率随时间的变化而变化。
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图3. 使用Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度与不同浓度病毒的转导滴度是有相关性的。使用Lenti-X Packaging Single Shots慢病毒包装系统制备Lenti-X ZsGreen1慢病毒。将制备出的病毒样品进行梯度稀释，添加到Lenti-X GoStix Plus cassettes中，进行密度分析测定滴度。另外，将每个梯度稀释液使用HT1080细胞测定实际的IFU/ml。未知样品的IFU/ml使用GV与IFU/ml的比值进行计算，该比值由使用与未知样品相同的包装系统和在相同的时间收集的参考病毒来确定。然后以使用Lenti-X GoStix Plus测定并计算出的IFU/ml与实际IFU/ml作图。
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图4. Lenti-X GoStix App通过测定测试（T）和对照（C）条带的相对强度来定量病毒滴度。Lenti-X GoStix App使用智能手机相机确定测试（T）和对照（C）条带的相对强度，并使用比率计算滴度。
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图5. 使用Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度与不同包装系统的转导滴度是有相关性的。使用市面上销售的三种不同的慢病毒载体和包装系统制备ZsGreen1慢病毒。将所有制备样品稀释并添加到Lenti-X GoStix Plus cassettes中并进行分析。另外，将每个梯度稀释液使用HT1080细胞测定实际的IFU/ml。使用与未知样品相同的包装系统和在相同的时间收集的参考病毒所确定的GV与IFU/ml的比值，计算每个未知样品的IFU/ml。
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图6. 比较使用Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度和基于ELISA方法测定的病毒滴度。Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度可以与基于ELISA方法测定的病毒滴度以相同的方式使用Lenti-X Packaging Single Shots慢病毒包装系统制备Lenti-X ZsGreen1慢病毒。使用HT1080细胞测定转导细胞的百分比（％转导），然后进行FACS分析。此外，使用Lenti-X p24 Rapid Titer Kit测定病毒p24值，使用Lenti-X GoStix Plus确定GoStix值。以一定范围MOIs的病毒转导HT1080细胞，以其转导效率和等同的ELISA和GoStix值作图。转导后48小时拍摄转导细胞的荧光图像。
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