TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)酶试剂盒Takara

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TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR024A TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 50 Rxns ￥1,472 TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
Takara RR024B (A × 2) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 50 Rxns × 2 ￥2,653 TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
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■ 制品内容 (Code No.: RR024A : 50 次量)
AMV Reverse Transcriptase XL*1 (5 U/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml × 2 支
RNase Inhibitor (40 U/μl) 50 μl
AMV-Optimized Taq (5 U/μl) 50 μl
10X One Step RNA PCR Buffer 250 μl
dNTP Mixture (各10 mM) 250 μl
MgCl2 (25 mM) 500 μl
Control F-1 Primer (20 μM)*1
(Positive Control RNA用上游引物)		 25 μl
Control R-1 Primer (20 μM)*1
(Positive Control RNA用下游引物)		 25 μl
Positive Control RNA*3 (2×105 copies/μl)
(poly A+ RNA transcribed from pSPTet3 plasmid)		 25 μl
   
*1：各种引物序列
引物名称 各引物序列
Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
 
*2：本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。
 
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
图1. Positive Control RNA：进行Control实验时所能扩增的DNA片段
 
 
■ 制品说明
PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应) 是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒采用了一步反应法 (One Step法) 完成RT-PCR反应。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中进行，反应中途不需添加任何试剂，就可以完成由AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由来的反转录酶从RNA反转录为cDNA，再由AMV-Optimized Taq (根据LA PCR技术研制) 扩增cDNA的全部反应。
常规RT-PCR试剂盒采用2 step PCR进行连续反应，并分别配制反应液，这些操作增加了污染的可能性，而本试剂盒可降低污染，并且提供的AMV-Optimized Taq可用于LA PCR。本试剂盒中含有进行One Step法RT-PCR反应用的全部试剂，可以简便而有效地对RNA进行扩增分析。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ One Step RT- PCR的原理
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 可在同一反应管中完成由AMV 反转录酶从RNA反转录为cDNA，再使用AMV-Optimized Taq扩增此cDNA的RT-PCR反应。
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
图2. One Step RT-PCR原理图
 
■ 特点
      RNA模板      适用于所有RNA
      扩增片段大小      ～5.6 kb
      反转录酶     AMV Reverse Transcriptase XL (反转录反应温度在42℃～60℃)
      反转录引物      特异性下游引物(PCR扩增反应用反义链引物)（不可以使用 Oligo dT primer和 Random primer）
      DNA Polymerase      AMV-Optimized Taq
      RNase Inhibitor      Kit中含有
      操作      在同一反应管中连续进行 (PCR反应前加热使RTase失活)
 
■ 注意事项
1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液(Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2 等)，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用RTase、RNase Inhibitor、AMV-Optimized Taq酶等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
6. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random 9 mers、Oligo dT Primer不能使用。