| HAT-标签 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 631205 | HAT Protein Expression and Purification System | 1 Set | ￥8,518 |  |
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| ■ 产品介绍 | |||||
| HAT（组氨酸亲和标签）蛋白质表达和纯化系统为蛋白质表达和纯化提供了方便且有效的解决方案。 HAT载体编码一种新的多聚组氨酸表位标签，这种标签可以使细菌中表达的蛋白质在中性或生理pH、变性或非变性条件下进行纯化。 |
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| HAT系统 | |||||
| HAT表位是天然存在的非相邻组氨酸残基序列，其总电荷比具有连续His残基标签的低。 HAT融合蛋白质的溶解度更接近野生型蛋白质，同时对固定化金属离子仍具有很强的亲合力，使用HAT系统纯化蛋白质有两个主要优点： ● 蛋白质是可溶的，因此它不会形成聚集体或包涵体 ● 蛋白质可以在温和条件（例如中性pH或低咪唑浓度）下洗脱 使用TALON树脂纯化pHAT载体表达的蛋白质是一种很好的选择，搭配分批法、重力流法或者使用TALON superflow树脂搭配中压的FPLC纯化。TALON树脂的钴离子对HAT以及其他的多聚组氨酸标签蛋白质有很强的亲和力，对其他蛋白质的亲和性很低。TALON树脂理想的选择特异性降低了背景，洗涤的步骤较少并且为中性，因此能够非常好的保持蛋白质的完整性。 |
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| pHAT载体 | |||||
| HAT系统包含3种pHAT载体——pHAT10/11/12，三者结构相同，只是多克隆位点处的阅读框稍有不同。每个载体都有肠激酶（EK）切割位点，用来将纯化的蛋白质的HAT序列除去。 限制性酶切位点的存在是为了可以将HAT序列切除（带或不带EK位点），以便于克隆至其他载体。 单独提供的pHAT20载体，具备pHAT10/11/12的所有优点，并且提供额外的克隆位点，使用方便，更容易将您的cDNA框与HAT序列融合。 |
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| 产品特点 | |||||
| ● 在中性pH下纯化蛋白质 ● 在变性或非变性条件下使用 ● 蛋白质溶解度更高 ● 用TALON IMAC树脂可以得到优化的纯化产物 |
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| 应用 | |||||
| 在细菌系统中更容易表达和纯化蛋白质，并且蛋白质溶解度更高。 | |||||
| 实验例 | |||||
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| FPLC方法纯化HAT标签蛋白质。使用组分为50 mM sodium phosphate，0.3 M NaCl，5 mM imidazole，pH7.0的buffer破碎E. coli细胞提取蛋白质并纯化，最终以150 mM imidazole进行洗脱。 | |||||
| 图A. 使用TALON Superflow柱对细胞裂解液进行纯化 图B. SDS-PAGE 分析 M: 分子量marker |
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| 6xHis、6xHN和HAT标签的氨基酸序列 | |||||
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