| SARS-CoV-2假病毒包装系统 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 632668 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length) | 12 Rxns | ￥11,935 |  |
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| Clontech | 632669 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length) | 12 Rxns | ￥11,935 | |
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| Clontech | 631292 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length) | 12 Rxns | ￥11,935 |  |
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| Clontech | 632670 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated) | 12 Rxns | ￥11,935 | |
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| Clontech | 632671 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated) | 12 Rxns | ￥11,935 | |
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| Clontech | 631293 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated) | 12 Rxns | ￥11,935 | |
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| Clontech | 632672 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) | 12 Rxns | ￥9,732 | |
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| Clontech | 632673 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) | 12 Rxns | ￥9,732 | |
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| Clontech | 631290 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) | 12 Rxns | ￥11,935 | |
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| Clontech | 632674 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) | 12 Rxns | ￥9,732 | |
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| Clontech | 632675 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) | 12 Rxns | ￥9,732 | |
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| Clontech | 631291 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) | 12 Rxns | ￥11,935 | |
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| Clontech | 632676 | Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) | 6 Rxns | ￥4,844 | |
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| 开发COVID-19疗法的一个共同目标就是要证明对SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用。基于安全措施考虑，目前研究人员大多使用带有SARS-CoV-2刺突蛋白（spike protein）的假病毒（Ni et al. 2020, Shang et al. 2020）替代SARS-CoV-2活病毒开展研究。我们对Lenti-X包装系统进行了优化，这样可以很方便地制备高滴度的spike-假慢病毒，为这些研究工作提供支持。 |
| Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots试剂盒包括：含有Xfect转染试剂和慢病毒包装质粒的冻干混合物，慢病毒包装质粒携带四种不同刺突蛋白变体中的其中一种；表达绿色荧光蛋白质ZsGreen1和荧光素酶报告基因的转移载体；制备缺少包膜蛋白慢病毒粒子的转染混合物（通常用作阴性对照）。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots试剂盒，通过简便的一步法即可获得高滴度SARS-CoV-2假病毒：只需将含有您选择的转移载体的水溶液添加至单管中，然后使用重组后的转染混合物转染培养在10厘米培养皿中的包装细胞Lenti-X 293T Cell Line（Code No. 632180）。转染后48–72小时收集病毒上清液。 |
| 有多种包装系统可供选择，可制备带有6种不同SARS-CoV-2刺突蛋白变体的病毒粒子： |
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· WT Spike, Full Length—野生型（全长），来源于新型冠状病毒SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1分离株 (NC_045512.2) , 我们对密码子进行了优化，可以在哺乳动物细胞中表达 为方便起见，Lenti-X SARS-CoV-2 packaging mixes也可以单独购买。 |
| ■ 概述 |
| · 高性能包装系统有助于始终获得高病毒滴度：避免在试剂优化上花费时间，让您可以专注于下游分析 · 便捷的单管形式可大大减少动手时间和出错的可能性：操作简便，只需要将含有所选择转移质粒的水溶液，添加至包装细胞培养液中即可 · 包装混合物可以单独购买，也可以打包购买：节约资源，按需购买 · 提供中和试验对照：可使用试剂盒中的包装混合物，制备缺少包膜蛋白的慢病毒粒子，用作阴性对照 · 3种不同的SARS-CoV-2刺突蛋白变异体：Wuhan-Hu-1、D614G、B.1.351 · 提供配套宿主细胞ACE2 cell line |
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| 图1 . 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备假病毒操作流程。 |
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| 图2. 使用SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性细胞。Panel A. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备表达WT (Wuhan-Hu-1) 或者D614G变体刺突蛋白，同时也表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的假慢病毒粒子。每种病毒制剂取100 μl，转导稳定表达人ACE2受体的HEK293T细胞，HEK293T细胞培养在含有6 μg/ml polybrene 的48孔板中。转导后6天通过流式细胞术测定每个样品的转导效率。Panel B. 使用表达萤火虫荧光素酶的假病毒分别转导ACE2-阳性和不表达ACE2的HEK293T细胞（用于提供荧光素酶活性分析背景信号）。转导后6天测定荧光素酶活性。 |
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| 图3. 测定使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots获得的功能滴度。Panel A.使用SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性HEK293T细胞，通过分析ZsGreen1荧光标记的表达情况测定功能滴度。Panel B. 感染后72小时，ACE2-阳性细胞的显微图像。 |
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| 图4. 可溶性ACE2蛋白对携带SARS-CoV-2刺突蛋白变体假病毒的中和活性。Panels A and B. 梯度稀释融合IgG Fc结构域的可溶性ACE2蛋白（ACE2-Fc），与SARS-CoV-2假病毒作用于ACE2 HEK293T细胞。感染后3天检测荧光素酶表达水平，作为病毒感染性读数。数据以相对于仅病毒对照感染的中和作用百分比表示。数值为平均值±标准差，每个实验重复三次。 |
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| 图5. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备D614G和B.1.351变异型SARS-CoV-2假病毒，测定其转导效率和感染滴度。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots（B.1.351或D614G，全长或截短）制备表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒。按照标准操作指导，使用Lenti-X Concentrator将病毒液浓缩50倍（B.1.351全长）或20倍（B.1.351截短和D614G），取不同体积病毒液转导HEK293T细胞，此细胞在48孔板中培养，含有6 μg/ml聚凝胺，能稳定表达人ACE2受体。在转导后6天通过流式细胞仪测定每个样品的转导效率（Panel A），并计算功能滴度（Panel B）。 |
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| 图6. 表达萤火虫荧光素酶的B.1.351 SARS-CoV-2假病毒转导ACE2 HEK293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 spike, 全长或截短)制备表达萤火虫荧光素酶的假病毒。按照标准操作指导，使用Lenti-X Concentrator将病毒液浓缩20倍，取不同体积病毒液转导HEK293T细胞，此细胞在48孔板中培养，含有6 μg/ml聚凝胺，能稳定表达人ACE2受体。同时平行转导不表达ACE2受体的HEK293T细胞以确定背景发光水平，因为在缺乏ACE2受体的情况下，SARS-CoV-2假病毒无法感染HEK293T细胞。在转导3天后测定每个样品的发光值。 |
| 参考文献 |
| 1. Detection of SARS-CoV-2-Specific Humoral and Cellular Immunity in COVID-19 Convalescent Individuals. Ni, L. et al. Immunity. (2020) 52, 971–977. 2. Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2. Shang, J. et al. Proc Natl Acad Sci USA. (2020) 117, 11727–11734. 3. Evolutionary and structural analyses of SARS-CoV-2 D614G spike protein mutation now documented worldwide. Isabel, S. et al. Sci Rep. (2020) 10, 14031. 4. Optimized Pseudotyping Conditions for the SARS-COV-2 Spike Glycoprotein. Johnson, MC. et al. J Virol. (2020) 94, e01062-20. |
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