glenresearch 60-5000-96说明书

Quenching buffer for Glen-Pak™ purification reagent RNA purification

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Glen Pak的原则™ DNA/RNA纯化

与Poly Pak一样™ 墨盒，Glen Pak™ 盒利用保留在寡核苷酸上的5’DMT将全长序列特异性结合到支持物上。在纯化过程中，故障序列被消除，DMT随后被去除，从而允许纯化产物的洗脱。

与传统固相相比，Glen-Pak净化系统有许多优点

萃取（SPE）系统。

多才多艺

直接纯化寡核苷酸，无需任何预纯化干燥步骤，来源：

♦ 氢氧化铵

♦ AMA（氢氧化铵/40%甲胺水溶液1:1）

♦ 叔丁胺/水1:3（v/v）（1）

♦ 甲醇中的50mM碳酸钾（2）

♦ 甲醇/水中0.4M氢氧化钠4:1（v/v）（3）

使用适用于手持式注射器、真空歧管或高通量96孔板的筒。

（1）加载前，用100 mg/mL氯化钠1:7（v/v）稀释叔丁胺/水溶液。

（2）稀释50mM钾

Purification of DNA Oligonucleotides (DMT-ON)

Materials Amount Used

Glen-Pak DNA Purification Cartridge (60-5100-XX, 60-5200-XX) 1

Vacuum manifold (96 well or 12-24 port SPE type, if appropriate) 1

HPLC Grade Acetonitrile 0.5mL

2.0M Triethylamine Acetate (60-4110-XX, TEAA, pH7) 1mL

100 mg/mL Sodium Chloride 1mL

Salt Wash Solution (5% Acetonitrile in 100mg/mL Sodium Chloride) 2mL

2% Trifluoroacetic Acid (TFA)/Water (60-4040-57) 2mL

Deionized Water 2mL50% Acetonitrile/Water containing 0.5% ammonium hydroxide* 1mL

程序

样品制备

1.DNA合成后，在1mL氢氧化铵或氢氧化铵/甲胺（AMA）中正常脱保护DMT-ON寡核苷酸。不需要冷冻干燥脱保护溶液。为了使该程序成功，合成必须进行DMT-ON。碱不稳定的保护基团必须用AMA或氢氧化铵（1.0mL）去除。

2.向脱保护的DMT-ON寡核苷酸中加入1mL 100 mg/mL氯化钠溶液，最终体积为2mL。样品的最终盐浓度必须在50 mg/mL左右，以便在试剂盒上装载寡聚物。可能会加载更大的卷，但这是我们建议在盒带上加载的卷。

墨盒准备

3.将所需数量的150 mg药筒放入输出导向器下方机架中的歧管和收集管（如果需要）的阴鲁尔端口中。我们通常使用12端口歧管。

4.打开真空，使用真空控制阀将压力调节至~7mm Hg。（如果歧管上没有可用的控制阀，则将流速设定为每秒1-2滴左右）。使用0.5mL乙腈和1mL 2M TEAA对滤筒进行处理。

乙腈冲洗树脂上的有机残留物并将其润湿，而TEAA作为离子配对试剂来增强DMT-ON寡核苷酸与树脂的结合。

净化程序

5.将低聚/盐混合物以1mL等分试样的形式涂抹在试剂盒上（收集洗脱液并保存，以防装载失败或错误）。在装载过程中，DMT-ON寡聚物倾向于粘附在卡盘填料上，而大多数故障序列没有保留下来。

6.用2 x 1mL的盐洗液清洗滤筒。这将清除盒带中剩余的故障序列。

7.用2 x 1mL的2%TFA冲洗滤筒。拆卸DMT时，可能会看到微弱的橙色条带

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