慢病毒浓缩试剂（5x）说明书

产品详情

 

产品描述

慢病毒浓缩试剂（5x）是针对慢病毒富集而优化的聚合物材料，它提供了一种简单、快速、高效的慢病毒颗粒浓缩方法。只需将慢病毒上清液与慢病毒浓缩试剂按比例混合，短时间孵育，采用标准离心机进行离心即可得到慢病毒颗粒沉淀。超滤、超速离心法等病毒浓缩法，操作时间长，步骤繁琐，且通常会有细胞碎片和血清蛋白等的污染，病毒纯度低。使用本产品进行病毒浓缩后，病毒滴度可提高10-100倍，病毒回收率最高可达约90%，病毒损失少，并且病毒在浓缩过程中能保持病毒生物活性。整个实验过程可在4小时内快速完成，无需超速离心即可获得出色的回收效率。

产品特点

　简单快速——操作简单，无需超速离心，确保活性，实验耗时不超过4小时

　　浓缩效果优——病毒滴度可浓缩10-100倍以上

　　回收效率高——慢病毒回收效率高达90%以上

　　应用范围广——适用于所有类型的慢病毒颗粒

使用方法

使用方法

1.将含有慢病毒颗粒的培养基转移至无菌容器中，300xg离心10分钟以除去细胞碎片。

　　Ø为保证病毒活性，浓缩前的病毒上清液应尽量选择新鲜收集的病毒原液。

　　2.使用0.22μm过滤器过滤上清液至无菌容器中。

　　Ø如果使用滤膜过滤，推荐使用低蛋白结合力的纤维素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不推荐使用硝酸纤维素膜（NC）。

　　3.向每4体积含慢病毒的上清液中加入1体积慢病毒浓缩试剂（5x），使慢病毒浓缩试剂（5x）稀释为工作浓度（1x）。

　　4.将上述混合物于4℃摇床中慢速孵育3小时或过夜。

　　Ø慢病毒颗粒在4℃可稳定长达4天。

　　5.将混合物4℃4000xg离心25分钟。离心后，慢病毒颗粒可能在容器底部显示为米色或白色沉淀。

　　6.小心弃去上清液，4℃4000xg离心5分钟，再次弃尽残余液体，应尽量避免吸走沉淀物，该沉淀物即为慢病毒颗粒。

　　7.用初始体积（原上清液体积）1/10-1/100预冷的慢病毒保存液重悬病毒颗粒，使用移液器小心吹打，重悬慢病毒颗粒。

　　Ø重悬病毒沉淀时，吹打操作要轻柔，可选择慢病毒保存液（LS110R）、Complete medium或FBS重悬慢病毒。

　　8.小体积分装慢病毒，储存于-80℃冰箱或液氮中，留取少量病毒测定滴度。

　　Ø应尽量避免慢病毒反复冻融，否则会降低病毒滴度。

实验案例分析

 

注意事项

　1.为了您的健康安全，请规范操作，穿戴实验服与手套开展实验；

　　2.所有慢病毒操作均需在生物安全柜（BSL2级）中进行；

　　3.本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及治疗。

运输及保存方法

冰袋（wetice）运输。4℃保存，有效期12个月。

产品描述

细胞周期（cell cycle）是指连续分裂的细胞从一次分裂完成开始到下次分裂为止的全过程，分为间期和分裂期（M期），细胞间期又分为休眠期（G0期）,DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）整个周期可以表示为：G0-G1-S-G2-M。

本公司生产的细胞周期检测是通过经典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法进行周期分析的检测试剂盒。PI是一种DNA的荧光染料，可以结合双链DNA产生荧光，其荧光强度与DNA的含量成正比。经碘化丙啶染色后假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。利用流式细胞仪进行荧光分析从而对DNA进行定量，实现细胞周期检测。

产品组成

本试剂盒常用于贴壁细胞或者悬浮细胞的培养，如果检测对象为组织样品，必须消化成单个细胞后在进行染色检测，规格为50T，每T可检测的样本的细胞数量在10-100万之间。

 

 

 

运输与保存

冰袋运输，-20℃保存一年。

实验步骤

1. 细胞样品的准备：

a. 对于贴壁细胞：收集培养液上清，PBS润洗细胞一遍，胰酶消化细胞，加入前面收集的培养液终止消化，得到的细胞悬液1000g离心5min收集细胞沉淀备用。

b. 对于悬浮细胞：1000g左右离心3-5 min，沉淀细胞。

（如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力）

2.细胞固定：

（1）向步骤1收集得到的沉淀中加入300 μL预冷的PBS，轻柔吹打混匀，轻柔涡旋的过程中滴加700 μL预冷的无水乙醇，最后于4℃固定30 min或更长时间。通常固定2 h或以上更能保证染色效果，固定12-24h可能效果更佳。

（2）1000g左右离心5 min去除固定液，预冷PBS清洗一遍后再次离心，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3. 细胞染色：

（1）参考下表配制碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜当日内使用）：

 

（2）每个样品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液缓慢并充分重悬细胞沉淀， 37ºC避光孵育30min。随后可以4ºC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h内完成流式检测。

4.流式检测分析：检测激发波长为488 nm处红色荧光，用流式细胞仪对DNA含量进行分析，确定细胞周期变化情况。

注意事项

（1）需自备PBS和70%乙醇，整个过程避光操作。

（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。

（3）本产品仅作科研用途！