热启动直扩型Taq DNA聚合酶(dNTP)说明书

产品详情

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本酶为Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq1）的热启动型，需95度加热5分钟或98度加热2分钟而激活。Taq-D DNA聚合酶是大肠杆菌重组表达的嗜热细菌Thermus aquaticus来源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（删除了5’ 外切酶结构域）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探针法q-PCR。本酶经基因工程改造，尤其适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型。扩增片段的长度可达3 kb。延伸速度为1.0 kb/min（72℃）。

特点

·  本酶为热启动聚合酶，可提高扩增的特异性，减少非特异性扩增和引物二聚体；

·  热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min；

·  模板DNA耐受范围广；

·  PCR产物具有3’-dA尾巴，可直接用于T/A克隆；

·  可以掺入dUTP、dITP、荧光标记核苷酸。

·  相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加适合未处理的血液、组织、唾液等样本的PCR；

浓度

2.5U/μl

活性定义

以大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，将10 nmole脱氧核糖核苷酸掺入到酸不溶物中所需的酶量，定义为一个活性单位（U）。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。

 

 

 

产品包装规格及组成

运输与保存

-20℃保存 冰袋运输

适用范围

·       溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型

·       DNA荧光标记

·       血液、组织样本等直扩PCR

应用举例

以下反应举例为50 μl标准PCR体系， 仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

      *DNA template可参照如下标准（50 μl PCR体系）：

   PCR反应条件

注意事项

·       本酶为热启动聚合酶，需95度加热5分钟或98度加热2分钟而激活；因此有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增和引物二聚体，得到良好的PCR结果。

·       Taq-D DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3’末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。

· 碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq-D DNA聚合酶的碱基错误率为1×10^-5。

· 对非热启动酶而言，建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。

· 如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性

· 本公司Buffer经大量PCR反应实例优化而成，然而对某些PCR反应存在一个镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的buffer和MgCl₂/MgSO₄。

 

      本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

质量控制

相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶污染。PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20度。