k-assay KT-7519说明书

Human Apoptosis InducingFactor (AIF) ELISA

诱导人凋亡
因子（AIF）ELISA
用于定量测定血清、血浆中的人类AIF，
组织匀浆和其他生物液体
货号：KT-7519

预期用途
该试剂盒是一种夹心酶免疫分析法，用于体外定量测定人体AIF
血清、血浆、组织匀浆和其他生物液体。仅供研究使用。不适用于
诊断程序。

需要但未提供的材料
1.带450±10 nm滤光片的微孔板阅读器。
2.单通道或多通道移液管，具有高精度和一次性j端。
3.微量离心管。
4.去离子水或蒸馏水。
5.用于吸干微孔板的吸水纸。
6.洗涤液容器。
7.0.01 mol/L（或1×）磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH值7.0-7.2。
存储
所有试剂应按照瓶上的标签保存。校准器、检测试剂A、，
检测试剂B和96孔条形板在接收时应储存在-20°C下，而其他试剂则应储存在-20°C下
温度应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中，并向其提供干燥剂
尽量减少暴露在潮湿空气中。打开的测试套件将在1个月内保持稳定，前提是将其储存为
如上所述。

测试原理
本试剂盒中提供的微孔板已预涂有AIF特异性抗体。校准器
然后，将样品添加到适当的微孔板孔中，并加入一种特定于
AIF。接下来，将结合辣根过氧化物酶（HRP）的抗生物素蛋白添加到每个微孔板中，并
孵化。加入TMB底物溶液后，只有那些含有AIF、生物素结合抗体和酶结合亲和素的孔才会出现颜色变化。酶底物反应为
通过添加硫酸溶液终止，并测量颜色变化
在450 nm±10 nm的波长下进行分光光度测定。样品中的AIF浓度为
然后通过将样品的外径与校准曲线进行比较来确定。

样本收集和储存
血清
使用血清分离管，让样本在室温下凝结两小时，或在室温下凝结过夜
在大约1000 x g的条件下离心20分钟前，温度为4℃。测定新鲜制备的血清
立即或在-20°C或-80°C下等分储存样品，以备日后使用。避免反复冻融
周期。
等离子体
使用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血浆。在1000 x的温度下离心样品15分钟
g在收集后30分钟内，在4°C下。立即清除血浆并进行分析，或将样品储存在
在-20°C或-80°C下等分供日后使用。避免重复冻融循环。
组织匀浆
组织匀浆的制备取决于组织类型。
1.在冰冷的PBS中冲洗组织，*清除多余的血液，并称重
均质化。
2.将组织切碎成小块，并在新鲜的溶解缓冲液（不同的溶解缓冲液）中均质
需要根据目标蛋白质的亚细胞位置进行选择（w:v=1:20-1:50，例如1毫升裂解
使用冰上玻璃均质器（微型组织研磨机）将缓冲液添加到20-50 mg组织样品中
也很有效）。
3.使用超声波细胞破碎机对所得悬浮液进行超声波处理，直到溶液澄清。
4.然后，匀浆在10000×g下离心5分钟。收集上清液并
立即测定或等分并储存在≤-20摄氏度。
其他生物液体
以1000 x g离心样品20分钟。收集上清液并立即进行分析或储存
在-20°C或-80°C下等分取样，以备日后使用。避免重复冻融循环。
注:
1.5天内使用的样品可储存在4°C下，否则样品必须储存在-20°C下
(≤1个月）或-80°C(≤2个月）以避免生物活性丧失和污染。
2.样本溶血会影响结果，因此不应使用溶血样本。
3.进行分析时，将样品置于室温。
4.根据我们的检测结果，强烈建议使用血清而不是血浆进行检测
内部数据

试剂制备
使用前，将所有套件组件和样品置于室温（18-25℃）。如果不使用该套件
一次完成后，请只取出当前实验的试纸和试剂，剩下的留着
所需条件下的试纸条和试剂。
校准器
用1.0 mL校准液稀释校准液，在室温下保存10分钟，
轻轻摇动（不要起泡）。储备溶液中校准器的浓度为4000 pg/mL。
请先将储备液稀释至1000pg/mL，稀释后的校准液为最高值
校准器（1000 pg/mL）。然后准备7根含有0.5 mL校准液稀释液的试管，并使用稀释液
根据下图所示，校准器产生双稀释系列。混合每根管子
在下一次转移前*检查。设置7点稀释校准器，如1000pg/mL、500pg/mL、，
250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.2 pg/mL、15.6 pg/mL，以及最后一支带有校准器的EP管
稀释剂为空白，为0 pg/ml。