biontex Proteofection常见问题解答

biontex Proteofection常见问题解答

Proteofectene® 和 Proteofectene®AB 有什么区别?

PROTEOfectene®PROTEOfectene® AB是含有 Proteofectene®AB 的脂质制剂,专为抗体的蛋白转染而开发。

► Proteofection 使用的蛋白质或抗体必须具有什么样的质量?

您感兴趣的蛋白质或抗体中存在的任何杂质、污染物或添加剂都可能影响PROTEOfectene®PROTEOfectene® AB 的递送效率因此,使用尽可能纯的蛋白质/抗体。
如果与感兴趣的蛋白质相比存在过多的稳定剂,例如去污剂,则可以抑制递送。稳定剂如甘油或其他类似的添加剂不会干扰蛋白质的传递。

► BSA 是否会干扰 Proteofectene AB 的 Proteofection?

抗体溶液中的 BSA 会抑制抗体递送!0.1% 到 2% BSA 是抗体溶液中的常见浓度——这意味着 1 mg/ml 到 20 mg/ml。在这些溶液中,BSA 的比例大大超过了抗体。BSA 在抗体PROTEOfectene® AB 复合物形成期间与抗体竞争,因此抑制抗体递送。

► 防腐剂会干扰 Proteofect 吗?

如果防腐剂如叠氮化纳以高浓度存在,则可能会导致细胞毒性。如有必要,可通过透析去除。

► 什么是 Proteofectene® Reagent,它是如何工作的?

PROTEOfectene®是一种基于脂质的制剂,可与蛋白质形成非共价复合物。这些复合物被细胞内化,蛋白质被释放到细胞质中。
只需将您感兴趣的蛋白质与PROTEOfectene®在 1xPBS 中孵育10-15 分钟,用无血清培养基稀释,然后将混合物应用于您的细胞,3-48 小时后,您就可以检测蛋白质活性了。

► 用 Proteofectene® 和阳性对照 R–藻红蛋白对我的细胞进行蛋白转染是成功的,但用我的蛋白质进行的蛋白转染不起作用!

由于它们的特定特性,某些蛋白质可能无法通过PROTEOfectene®有效递送因此,在生理条件下带正电荷的碱性蛋白质很难被引入细胞。另一个原因可能是前蛋白的杂质(例如去污剂、防腐剂、稳定剂)。

► 为什么要直接对纯化的蛋白质进行 proteofect?

与使用转染 DNA 的基因表达研究相比,蛋白质转染 (Proteofection) 的速度非常快,因为它绕过了转录和翻译等细胞过程。此外,避免了潜在有害的随机 DNA 整合到目标细胞的基因组中。PROTEOfectene®可以将活性蛋白质直接输送到细胞中,用于涉及细胞周期、细胞凋亡和许多其他因素的各种问题的研究。

► 为什么 Proteofectene® 试剂盒中包含 R–藻红蛋白?

R-藻红蛋白 (100 µg/ml) 与PROTEOfectene® 一起提供作为阳性对照。以 1:2 的蛋白质:脂质比使用它(对于 1 μg 蛋白质,需要2 μl PROTEOfectene®)。
R 藻红蛋白已被输送到许多不同的细胞中,因此成功输送的可能性很高。提供此对照蛋白是为了帮助您设置实验,并且应该用于您实验的每个新细胞系。如果细胞毒性是一个问题,阳性对照使用户能够确定递送的蛋白质是否影响细胞活力。

► 为什么 FITC-IgG 包含在 Proteofectene®AB 试剂盒中?

FITC 标记的 IgG(阳性对照,100 μg/ml)是一种荧光标记的抗体(免疫球蛋白)作为阳性对照。以 1:1 – 1:2 的抗体:试剂比例使用(对于 1 μg 抗体,需要 1-2 μl PROTEOfectene® AB)。提供此对照抗体是为了帮助您设置实验,并且应该用于您实验的每个新细胞系。FITC-IgG 已被输送到许多不同的细胞中;因此,成功运输的可能性很高。