作为一种分析性生物化学测定，ELISA 涉及通过在“分析”期间继续使用液体试剂的方法（即受控序列）检测液体样品中的“分析物”（即对其存在进行定量或定性分析的特定物质）。生化反应会产生一个信号，该信号可以很容易地量化和解释为样品中分析物量的量度），该信号保持液态并保持在反应室内或保持反应物被包含在内。

作为一种异质测定，ELISA 通过将某些组分吸附到物理固定的固相上来分离分析反应混合物的某些组分。在 ELISA 中，将液体样品添加到具有特殊结合特性的固定固相上，然后依次添加多种液体试剂、孵育和洗涤，然后发生一些光学变化（例如，酶促反应产物的显色）孔中的最终液体，用于测量分析物的量。定性“读数”通常基于通过分光光度法检测透射光的强度，这涉及对某些特定波长的光通过液体（以及多孔板格式中孔的透明底部）的透射进行定量。检测的灵敏度取决于分析反应过程中信号的放大。由于酶反应是放大过程，因此信号是由酶产生的，酶以固定比例与检测试剂连接，以实现准确的定量 – 因此称为“酶联”。

分析物也称为配体，因为它会特异性结合或连接到检测试剂，因此 ELISA 属于更大的配体结合测定类别。配体特异性结合试剂是“固定的”，即通常涂在透明底部，有时也涂在孔的侧壁上（这里是固定的“固相“固体基质”，而不是可以被固定的固体微粒/珠子）。洗掉），它通常被构建为称为“ELISA 板”的多孔板。通常，与其他形式的免疫测定一样，使用抗原-抗体型反应的特异性是因为它很容易作为试剂大量产生特异性针对抗原的抗体。或者，如果分析物本身是抗体，