abeomics 17-1101说明书

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萤光素酶报告基因检测试剂盒

Leeporter™ 萤光素酶检测试剂 – 1000 测试

产品编号：17-1101

应用 ： 功能分析
数量 ： 1 个套件
内容 ： 1000 次测试（96 孔板格式）。检测缓冲液含有 0.01% 叠氮化纳。
储存情况 ： 储存于 -20°C

Leeporter™ 萤光素酶检测试剂经过专门配制，可与表达优化的细胞内海肾萤光素酶的 Leeporter™（萤光素酶报告基因）细胞系一起使用，该细胞系旨在产生高度敏感的信号和延长的信号强度。作为一步发光检测试剂，Leeporter™ 萤光素酶检测试剂可以直接添加到与所使用的光度计兼容的细胞培养板中，无需稀释或将培养上清液或细胞裂解物转移到其他板上。

协议：

1) 底物 (100X) 重构：
将 0.5 ml 底物重构溶液添加到冻干底物瓶中，通过轻轻上下吹打和/或倒置试管*溶解。重构的 100X 底物可在 -20 o C 的黑暗环境中储存长达一个月。
2) 检测缓冲液：
在室温水浴中解冻 50 ml 的检测缓冲液，并通过旋转和/或轻轻涡旋*溶解任何沉淀物，直到溶液变得澄清。Assay Buffer 可以分装（例如每份 5-10 ml）并在 -20 o C 下保存数月。
3) 完整检测溶液的制备（适用于 96 孔板格式）：
为每次使用新鲜制备完整的检测溶液，应在 2 小时内使用。解冻检测缓冲液并通过涡旋和/或温和涡旋平衡至室温。计算需要多少完整的测定溶液（注意：96 孔板的每个孔需要 50 ul 的完整测定溶液）。将适量的 Assay Buffer 分装到 15 ml 试管中，并加入相应量的重构 100X 底物，制成最终的 1X 底物检测溶液。
4) 萤光素酶检测（96 孔板格式）：

1. 在白色实心底 96 孔微孔板（注意：使用的 96 孔板应与正在使用的光度计兼容）中以 100 ul 细胞/孔，根据相应的用于您的目标 Leeporter™ 细胞系的方案（注意：每个目标 Leeporter™ 细胞系方案都可以在其相应的数据表中找到。）。[每孔总体积为 100 uL ]

2. 根据您的目标 Leeporter™ 细胞系的相应方案刺激或处理您的目标细胞。[每孔总体积变为 105~110 uL = 100 ul 细胞 + 5~10 ul 处理]

3. 完成目标细胞的刺激/处理后，将含有待测目标细胞的 96 孔板平衡至室温 10 分钟（注意：不要移除或扰乱细胞培养基。）。

4. 使用多道移液器，将 50 ul Complete Assay Solution 直接加入每个板孔中（注意：添加 Assay Reagent 时不要去除细胞培养基。所以 50 ul Assay Reagent 应直接添加到孔上。每个孔的细胞培养。）。[每孔总体积变为 155~160 uL = 100 ul 细胞 + 5~10 ul 处理 + 50 ul 完整检测溶液]

5. 使用 automix 2-3 秒，然后在 1-5 分钟内用光度计读取板。（光度计设置示例：SpectraMaxL（Molecular Devices）：目标波长为 470nm，积分时间为 0.5 秒，自动混合为 2 秒）。

仅供研究使用。不适用于诊断/治疗程序。