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上海金畔生物大量现货alstembio VB100说明书

ViralBoost Reagent: #VB100

ViralBoost试剂：＃VB100

描述

ViralBoost试剂（500X）是一种新型的小分子混合物，可以增强病毒的产生，并且是有效包装病毒的强大，广泛适用的试剂。ViralBoost试剂在转录水平上稳定地调节病毒RNA的包装，可将逆转录病毒或慢病毒颗粒的产量提高多达10倍。易于使用的协议使ViralBoost试剂非常适合各种规模的病毒包装。

 

图1.来自GFP反转录病毒转导的HEK 293T细胞的流式细胞仪数据，GFP反转录病毒在不存在ViralBoost试剂的情况下包装。

 

 

图2. GFP慢病毒转导的HEK 293T细胞，有和没有ViralBoost包装

 

 

产品名称	病毒助推器
目录 ＃	VB100
尺寸	1毫升
运输	环境温度
储存和稳定性	储存在4℃。按说明存放该产品可稳定12个月。
质量控制	使用人类胚胎肾293T细胞在转染测定中对每批ViralBoost试剂进行了功能测试。
用法	用逆转录病毒或慢病毒包装质粒混合物转染人胚胎肾（HEK）293T细胞后6-14小时，用新鲜的DMEM培养基代替培养基，该培养基补充有10％热灭活的胎牛血清和0.5％青霉素-链霉素，并添加将1/500体积的ViralBoost试剂加入一体积的新鲜培养基中，并继续在37°C的CO2孵育箱中孵育。
限制使用	仅供研究使用。不适用于诊断或治疗程序。

ViralBoost试剂是一种新型的小分子混合物，可用于高滴度病毒生产，并且是有效包装病毒的强大，广泛适用的试剂。它在转录水平上稳定地调节病毒RNA的包装，可以极大地提高逆转录病毒或慢病毒颗粒的产量，多可提高10倍。易于使用的协议使ViralBoost试剂非常适合各种规模的病毒包装。

 

 

使用流程：

一天：转染前一天，

1.用1x明胶涂板/盘子30分钟。吸出明胶，并每100 mm平板接种约3-4 X 10 ^6个 HEK 293T细胞。每个板使用10 ml培养基。

注意：拥有良好的单细胞悬液（胰蛋白酶消化良好）并均匀分布细胞非常重要。

 

第二天：转染

注意：按照制造商的规程准备转染。

2.准备两个试管，然后向每个试管中加入0.5 ml DMEM。在一个试管中加入DNA混合物（包含病毒载体和包装混合物），并通过轻敲试管将其充分混合。在另一个管中，添加NanoFect（目录号NF100）。通过互联管混合。

注意：在室温（20–25°C）下孵育不超过5分钟。

3.将NanoFect-DMEM混合物转移到DNA管中，上下吸移2-3次。涡旋5-10秒，充分混合。

4.在室温下孵育约15分钟，以使NanoFect / DNA复合物自组装。

5.滴加NanoFect / DNA混合物到板中，轻轻摇动板并将板放回培养箱中

 

第三天：更换培养基并添加ViralBoost

6.用10 ml新鲜培养基代替上清液，并补充20 µl ViralBoost（500X）。将板返回细胞培养箱。

 

第四天：收集病毒

！注意小心处理病毒材料，避免溢出。使用漂白剂对危险液体进行消毒（终浓度为10％，持续30分钟）。

7.将上清液收集在50 ml锥形管中，并置于冰上。离心机中以千克上清液10分钟，以除去细胞碎片。（将离心机预设为4°C）

8.通过0.45 µm过滤器过滤上清液。将已过滤的上清液转移至无菌容器中，并每隔4体积的含病毒上清液添加1体积的冷逆转录病毒/慢病毒沉淀溶液（4°C，目录号VC100和VC200）。（例如：5毫升逆转录病毒/慢病毒沉淀溶液和20毫升病毒上清液）。

9.充分混合并冷藏过夜。

 

第五天：浓缩病毒

10.将混合物在4°C下以1500g离心30分钟。离心后，病毒颗粒可能在容器底部呈米色或白色沉淀。

11.丢弃上清液。通过以1500g离心5分钟来旋转残留溶液。抽吸去除所有液体，注意不要扰乱沉淀中沉淀的病毒颗粒。

12.使用冷的无菌PBS或DMEM在4°C下以原始体积的1/10至1/100重悬病毒沉淀。分装在低温小瓶中，并在-80°C下储存直至准备使用。

注意：可以使用病毒浓缩/纯化程序除去ViralBoost试剂。当直接用于转导HEK 293T细胞时，尚未检测到带有ViralBoost试剂的病毒颗粒粗品对目的基因表达的副作用，但不同细胞系之间可能存在差异。建议事先测试ViralBoost对靶细胞的作用。