myPOLS Biotec正在开发新一代的DNA聚合酶
用于和可靠的应用，例如个性化医疗，病原体检测，DNA和RNA诊断，法医学等等。
我们的研发活动包括：
- 改进的DNA聚合酶用于SNP检测和甲基化特异性PCR。
- 病原体检测分析，例如用于流感和诺如病毒诊断。
- 具有逆转录酶活性的热稳定DNA聚合酶。
- 抑制剂抗性聚合酶，用于从样品中直接PCR，如全血，唾液，细菌，细胞 – 颗粒，植物等。
后但并非不重要：我们所有的酶和混合物都是在康斯坦茨内部生产的，并经过常规测试，符合高质量标准。
myPOLS Biotec是一家来自康斯坦茨大学的生物技术公司，来自Andreas Marx教授的研究小组。凭借我们在高通量DNA聚合酶设计方面的专业知识，我们为您的应用定制酶。
RRNA / RT-PCR
Volcano2G DNA聚合酶
是原始Volcano DNA聚合酶的下一代，具有进一步改善的逆转录活性。该酶是一种工程化的，极其热稳定的逆转录酶和组合的DNA聚合酶，通过定向的人工进化获得。
Volcano2G DNA聚合酶直接从RNA模板促进“零步骤”RT-PCR（没有等温逆转录步骤），因为在循环PCR延伸步骤期间逆转录与DNA扩增同时发生。这也允许在高温下进行逆转录反应，从而小化在高温下熔化的RNA中的强二级结构遇到的问题。
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文章 |
产品 |
尺寸 |
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＃8100S |
Volcano2G DNA聚合酶 |
250 U，5U /μl，50μl |
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＃8100M |
Volcano2G DNA聚合酶 |
1000U，5U /μl，200μl |
更简单，更快捷：0步RT-PCR协议：
跳过逆转录步骤。不需要等温反转录步骤。
Volcano2G是一种PCR活性逆转录酶，具有*的热稳定性，在95°C的半衰期> 40 min。
当添加实时PCR染料时，Volcano2G DNA聚合酶也可用于实时PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶样核酸酶结构域，因此也适用于基于水解探针的分析。如此处所示，通过使用基于探针的qPCR测定和零步骤RT-PCR方案，使用10倍稀释系列的总RNA检测NONO mRNA：
详细的产品说明
Volcano2G 5x反应缓冲液针对扩增子大小在60-300bp之间进行了优化。
当添加合适的实时PCR染料或荧光探针时，Volcano2G逆转录酶也可用于实时PCR。
这种*的酶能够进行基于PCR的RNA检测，无需单独的逆转录步骤。
Volcano2G逆转录酶可以可靠地检测≥1ng总RNA输入的RNA靶标。
Volcano2G DNA聚合酶不需要Mn 2+ 以获得宜活性。然而，通过向反应中添加Mn 2+可以进一步优化一些测定（建议的范围是0.5-1mM，未提供Mn 2+）。
质量控制
RT-PCR活性：测试Volcano2G DNA聚合酶活性的成功RT-PCR性能。在PCR循环仪中从人总RNA提取物扩增151bp片段（HPRT1 mRNA），并将其显示为单一扩增产物。
DNA聚合酶活性：已经使用人工DNA模板和DNA引物监测Volcano2G聚合酶活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
通过蛋白质特异性染色确定酶浓度。有关批次特定浓度，请通过info@mypols.de查询更多信息。
存储
本产品采用冷藏包装。请在抵达-20°C时存放产品。
应用
- 快速检测和鉴定RNA靶标
- 逆转录PCR（RT-PCR）
- 实时RT-PCR
- SELEX
- 入门扩展
反应设置
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零件 |
卷 |
终浓度 |
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引物前移（10μM） |
1μl |
500 nM（50-1000 nM） |
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引物反向（10μM） |
1μl |
500 nM（50-1000 nM） |
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dNTPs（10 mM） |
2μl |
400μM |
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5 x Volcano缓冲区 |
10μl |
1X |
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Volcano2G DNA聚合酶5 U /μl |
1μl |
5-10 U /反应 |
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模板/样品提取物* |
各种μl |
>（1-1000） |
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不含核酸酶的水 |
总反应体积高达50μl |
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将所有组件保存在冰上。
在使用前仔细旋转并混合所有溶液。
*推荐的终模板浓度在5-50 ng /μl之间。
典型的0步RT-PCR方案（不需要等温逆转录步骤）
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步 |
温度 |
时间 |
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初始变性 |
95℃ |
2分钟 |
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变性 |
95℃ |
15秒 |
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退火/延伸* |
各种* |
45秒（25-40周期） |
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可选的熔化步骤 |
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可以使用两步法和三步法PCR方案。
*通过运行温度梯度来理想地建立新的PCR，以便找到每个引物对的宜退火/延伸温度。引物的退火温度受其核酸序列和反应缓冲液组成（盐和pH）的强烈影响。Volcano2G DNA聚合酶在50-95°C之间活跃。
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