Favorgen FABGK 001-1说明书

 

Favorgen位于中国台湾国家生物技术园区。它通过自动化系统建立了ISO合格工厂,
生产高质量的分子生物学产品和临床化学试剂。目前,Favorgen在美国,中国,韩国和丹麦设立分支机构,并在30多个国家设立了分销网络。自成立以来,Favorgen已经在其先进的生产设施上投入了大量资金,以竞争力的价格为客户提供高质量的产品。Favorgen致力于通过与学术和行业合作伙伴的内部和合作开展研究,以不断提供高质量的创新产品。

Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction

核酸提取基因组DNA提取

Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit

FavorPrepTM Blood Genomic DNA Extraction Mini Kit

 

Cat.No. : FABGK 000, 4 Preps

FABGK 001, 50 Preps

FABGK 001-1, 100 Preps

FABGK 001-2, 300 Preps

(For Research Use Only)

 

 

 

Kit Contents:

 

FABGK 000

sample)

 

FABGK 001

 

FABGK 001-1

 

FABGK 001-2

 

 

* Preparation of W1 Buffer, Wash Buffer and proteinase K solution for first use:

Cat. No:

FABGK000

(4 preps)

FABGK001

(50 preps)

FABGK001-1

(100 preps)

FABGK001-2

(300 preps)

ethanol volume for W1Buffer *

0.5 ml

8 ml

16 ml

45 ml

ethanol volume for Wash Buffer **

4 ml

40 ml

80 ml

200 ml

ddH2O volume for Proteinase K solution

0.1 ml

1.1 ml

1.1 ml

1.1 ml

 

规格:

 

原理:自旋柱(硅胶膜)

 

样本:全血、血清、血浆、体液多可培养5×10 6细胞。

 

手术时间:<30分钟

 

结合容量:高可达60克/柱DNA产量:4~8微克/200升全血

 

 

 

 

 

 

 

 

 

重要说明:

 

本系统中提供的缓冲区包含刺激物。在处理这些缓冲器时,戴上手套和实验室外套。

 

将蛋白酶K管保存在-20°C,然后再加入所需体积的无菌ddH2O到蛋白酶K管中,制成10毫克/毫升的原液。旋涡,确保蛋白酶K是复合的 泰利解散了。将库存溶液存放在4°C。

 

次使用时,在W1缓冲液和洗涤缓冲液中加入所需体积乙醇(96%-100%)。

 

手术前将干洗或水浴预热至60°C。

 

所有的离心步骤都是在微型离心机中全速进行的(~18,000 x g)。

General Protocol:

“一般性议定书”:

 

提示:准备一个干洗浴或水浴至60°C浴进行第4步。预热洗脱缓冲液至65°C为第13步(洗脱步骤)。

 

在开始以下步骤之前,请阅读重要说明。

 

将多达200毫升的样本(全血、血清、血浆、体液、布菲大衣)转移到微离心管(未提供)。

 

如果样品体积小于200毫升,加入适当的PBS体积。

 

(可选):如果需要无RNA的基因组DNA,在样品中加入4升100 mg/ml的RNase A,在室温下孵育2 min。

 

在样品中加入20L蛋白酶K和200μl FABG缓冲液。通过脉冲旋涡充分混合.

 

不要直接将蛋白酶K添加到FABG缓冲液中。

 

在60℃下孵育15分钟,以提取样品。在孵化过程中,每隔3-5分钟将样品旋涡一次.

 

简单地旋转管子以去除从iid内部滴下的液滴。

 

在样品中加入200升乙醇(96%-100%)。用脉冲旋涡*搅拌10秒。

 

简单地旋转管子以去除从iid内部滴下的液滴。

 

将FABG微型柱放置到收集管上。将混合物(包括任何沉淀物)小心地转移到FABG微型柱上。离心机在6,000 x g下离心1分钟,然后将FABG微型柱放置在nee上。 W收集管。

 

加入400升W1缓冲器到FABG迷你柱和离心机全速(18,000 x g)30秒,然后丢弃流过。

 

加入750升洗涤缓冲器到FABG迷你柱和离心机全速30秒,然后丢弃流过。

 

确保乙醇在次打开时加入到洗涤缓冲液中。

 

全速离心3分钟,干燥柱。

 

重要的一步!这一步将避免残留液体对后续酶反应的抑制。

 

将FABG微型柱放置到发射管上。

 

在FABG微型柱膜中心加入50~200μl的洗脱缓冲液或DDH_2O(pH7.5-9.0)。将FABG微型柱站立3分钟。

 

重要的一步!为了进行有效的洗脱,要确保洗脱液被分配到膜中心并被*吸收。

 

全速离心1分钟以逃避总DNA。

 

1. 将总DNA储存在4°C或-20°C。特别议定书:

 

1.培养细胞

 

2. 收获细胞

 

3. 悬浮培养细胞

 

4. і.将适当数量的细胞(多5×10)转移到1.5毫升的微离心管中。іі。300×g离心5 min。

 

5. і.仔细而*地移除上清液。

 

6. 单层细胞

 

7. і.通过胰蛋白酶化或使用细胞刮刀将细胞从盘子或烧瓶中分离出来。

 

8. іі.将适当数量的细胞(多5×106)转移到1.5毫升的微离心管中。

 

9. і.300×g离心5 min。

 

10. іv.仔细而*地移除上清液。

 

11. 再生细胞颗粒在PBS中的终体积为200毫升。

 

12. 从第二步开始遵循“一般议定书”。

 

布瓦大衣的制备

 

将全血在3,300 x g下在室温下离心10分钟,可得到三个不同的组分:上清层为血浆;中间层为布皮,内含锥形。 额定红细胞;下层含有浓缩的红细胞。从步开始处理布菲大衣的一般协议。

 

从布菲皮毛中提取总DNA将比同等体积的全血产生5-10倍的DNA。

 

Troubleshooting

 

Possible reasons

Solutions

Low or no yield of genomic DNA

Low amount of cells in the sample

Concentrate a larger volume of a new sample to 200 ul. If the sample is whole blood, prepare buffy coat

Poor cell lysis

Poor cell lysis because of insufficient Proteinase K activity

Repeat the extraction procedure with a new sample. Use a fresh or well- stored Proteinase K stock solution.

Poor cell lysis because of insufficient mixing with FABG buffer

Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the sample and FABG Buffer immediately and thoroughly by pulse-vortexing.

Poor cell lysis because of insufficient incubation time

Repeat the extraction procedure with a new sample. Extend the incubation time and make sure that no residual particulates remain.

Ethanol is not added into the lysate before transferring into FABG Mini Column

Repeat the extraction procedure with a new sample.

Incorrect preparation of Wash Buffer

Ethanol is not added into Wash Buffer when first open

Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample.

The volume or the percentage of ethanol is not correct before adding into Wash Buffer

Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample.

Elution of genomic DNA is not efficient

pH of water (ddH2O) for elution is acidic

Make sure the pH of ddH2O is between 7.5- 9.0.

Use Elution Buffer (provided) for elution.

Elution Buffer or ddH2O is not completely absorbed by column membrane

After Elution Buffer or ddH2O is added, stand the FABG Mini Column for 5 min before centrifugation.

Column is clogged

Blood sample contains clots

Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the blood sample well with anti-coagulant to prevent formation of blood clots.

Sample is too viscous

Reduce the sample volume.

Degradation of elutated DNA

Sample is old

Always use fresh or well-stored sample for genomic DNA extraction.

Buffer for gel electrophoresis contaminated with DNase

Use fresh running buffer for gel electrophoresis.

 

 

 

 

基因组DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi试剂盒

FABGK 000

FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒

4个准备。

蛋白酶K粉末
FATL缓冲液
FABG缓冲液
W1缓冲液
洗涤缓冲液(浓)
洗脱缓冲液
FABG迷你柱
2ml收集管
1.5ml洗脱管

在室温(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,贮存于4℃。

FABGK 001

50个准备。

FABGK 001-1

100个准备。

FABGK 001-2

300个准备。

FABGK 100

FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒

100个准备。

RBC裂解缓冲液 FATL缓冲液 FABG缓冲液 W1缓冲液 洗涤缓冲液(浓) 洗脱缓冲液FABG迷你柱 2ml收集管 

 

在室温(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,贮存于4℃。

FABGK 300

300个准备。

 

 

FABGK 002-S

FavorPrep血液/培养细胞基因组DNA提取Midi试剂盒

2个准备。

蛋白酶K粉末
FABG缓冲液
洗涤缓冲液W1(浓)
洗涤缓冲液W2(浓)
洗脱缓冲液
FABG Midi柱
15 ml洗脱管

在室温(15~25℃)下保存2年。

除蛋白酶K粉外,贮存于4℃。

FABGK 002

20个准备。

FABGK000-MAXI

FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取Maxi试剂盒

2个准备。

Proteinase K Powder 
FABG Buffer 
W1 Buffer 
Wash Buffer(浓)
洗脱缓冲液
FABG Maxi Columns 
50 ml Elution tubes

在室温(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,贮存于4℃。

 

 

 

 

 

 

 

 

上海金畔生物是实验试剂一站式采购服务商

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