Favorgen位于中国台湾国家生物技术园区。它通过自动化系统建立了ISO合格工厂,
生产高质量的分子生物学产品和临床化学试剂。目前,Favorgen在美国,中国,韩国和丹麦设立分支机构,并在30多个国家设立了分销网络。自成立以来,Favorgen已经在其先进的生产设施上投入了大量资金,以竞争力的价格为客户提供高质量的产品。Favorgen致力于通过与学术和行业合作伙伴的内部和合作开展研究,以不断提供高质量的创新产品。
Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction
核酸提取基因组DNA提取
Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit
FavorPrepTM Blood Genomic DNA Extraction Mini Kit
Cat.No. : FABGK 000, 4 Preps
FABGK 001, 50 Preps
FABGK 001-1, 100 Preps
FABGK 001-2, 300 Preps
(For Research Use Only)
Kit Contents:
FABGK 000
sample)
FABGK 001
FABGK 001-1
FABGK 001-2
* Preparation of W1 Buffer, Wash Buffer and proteinase K solution for first use: |
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Cat. No: |
FABGK000 (4 preps) |
FABGK001 (50 preps) |
FABGK001-1 (100 preps) |
FABGK001-2 (300 preps) |
ethanol volume for W1Buffer * |
0.5 ml |
8 ml |
16 ml |
45 ml |
ethanol volume for Wash Buffer ** |
4 ml |
40 ml |
80 ml |
200 ml |
ddH2O volume for Proteinase K solution† |
0.1 ml |
1.1 ml |
1.1 ml |
1.1 ml |
规格:
原理:自旋柱(硅胶膜)
样本:全血、血清、血浆、体液多可培养5×10 6细胞。
手术时间:<30分钟
结合容量:高可达60克/柱DNA产量:4~8微克/200升全血
重要说明:
本系统中提供的缓冲区包含刺激物。在处理这些缓冲器时,戴上手套和实验室外套。
将蛋白酶K管保存在-20°C,然后再加入所需体积的无菌ddH2O到蛋白酶K管中,制成10毫克/毫升的原液。旋涡,确保蛋白酶K是复合的 泰利解散了。将库存溶液存放在4°C。
次使用时,在W1缓冲液和洗涤缓冲液中加入所需体积乙醇(96%-100%)。
手术前将干洗或水浴预热至60°C。
所有的离心步骤都是在微型离心机中全速进行的(~18,000 x g)。
General Protocol:
“一般性议定书”:
提示:准备一个干洗浴或水浴至60°C浴进行第4步。预热洗脱缓冲液至65°C为第13步(洗脱步骤)。
在开始以下步骤之前,请阅读重要说明。
将多达200毫升的样本(全血、血清、血浆、体液、布菲大衣)转移到微离心管(未提供)。
如果样品体积小于200毫升,加入适当的PBS体积。
(可选):如果需要无RNA的基因组DNA,在样品中加入4升100 mg/ml的RNase A,在室温下孵育2 min。
在样品中加入20L蛋白酶K和200μl FABG缓冲液。通过脉冲旋涡充分混合.
不要直接将蛋白酶K添加到FABG缓冲液中。
在60℃下孵育15分钟,以提取样品。在孵化过程中,每隔3-5分钟将样品旋涡一次.
简单地旋转管子以去除从iid内部滴下的液滴。
在样品中加入200升乙醇(96%-100%)。用脉冲旋涡*搅拌10秒。
简单地旋转管子以去除从iid内部滴下的液滴。
将FABG微型柱放置到收集管上。将混合物(包括任何沉淀物)小心地转移到FABG微型柱上。离心机在6,000 x g下离心1分钟,然后将FABG微型柱放置在nee上。 W收集管。
加入400升W1缓冲器到FABG迷你柱和离心机全速(18,000 x g)30秒,然后丢弃流过。
加入750升洗涤缓冲器到FABG迷你柱和离心机全速30秒,然后丢弃流过。
确保乙醇在次打开时加入到洗涤缓冲液中。
全速离心3分钟,干燥柱。
重要的一步!这一步将避免残留液体对后续酶反应的抑制。
将FABG微型柱放置到发射管上。
在FABG微型柱膜中心加入50~200μl的洗脱缓冲液或DDH_2O(pH7.5-9.0)。将FABG微型柱站立3分钟。
重要的一步!为了进行有效的洗脱,要确保洗脱液被分配到膜中心并被*吸收。
全速离心1分钟以逃避总DNA。
1. 将总DNA储存在4°C或-20°C。特别议定书:
1.培养细胞
2. 收获细胞
3. 悬浮培养细胞
4. і.将适当数量的细胞(多5×10)转移到1.5毫升的微离心管中。іі。300×g离心5 min。
5. і.仔细而*地移除上清液。
6. 单层细胞
7. і.通过胰蛋白酶化或使用细胞刮刀将细胞从盘子或烧瓶中分离出来。
8. іі.将适当数量的细胞(多5×106)转移到1.5毫升的微离心管中。
9. і.300×g离心5 min。
10. іv.仔细而*地移除上清液。
11. 再生细胞颗粒在PBS中的终体积为200毫升。
12. 从第二步开始遵循“一般议定书”。
布瓦大衣的制备
将全血在3,300 x g下在室温下离心10分钟,可得到三个不同的组分:上清层为血浆;中间层为布皮,内含锥形。 额定红细胞;下层含有浓缩的红细胞。从步开始处理布菲大衣的一般协议。
从布菲皮毛中提取总DNA将比同等体积的全血产生5-10倍的DNA。
Troubleshooting
Possible reasons |
Solutions |
Low or no yield of genomic DNA |
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Low amount of cells in the sample |
Concentrate a larger volume of a new sample to 200 ul. If the sample is whole blood, prepare buffy coat |
Poor cell lysis |
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Poor cell lysis because of insufficient Proteinase K activity |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Use a fresh or well- stored Proteinase K stock solution. |
Poor cell lysis because of insufficient mixing with FABG buffer |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the sample and FABG Buffer immediately and thoroughly by pulse-vortexing. |
Poor cell lysis because of insufficient incubation time |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Extend the incubation time and make sure that no residual particulates remain. |
Ethanol is not added into the lysate before transferring into FABG Mini Column |
Repeat the extraction procedure with a new sample. |
Incorrect preparation of Wash Buffer |
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Ethanol is not added into Wash Buffer when first open |
Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample. |
The volume or the percentage of ethanol is not correct before adding into Wash Buffer |
Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample. |
Elution of genomic DNA is not efficient |
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pH of water (ddH2O) for elution is acidic |
Make sure the pH of ddH2O is between 7.5- 9.0. |
Use Elution Buffer (provided) for elution. |
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Elution Buffer or ddH2O is not completely absorbed by column membrane |
After Elution Buffer or ddH2O is added, stand the FABG Mini Column for 5 min before centrifugation. |
Column is clogged |
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Blood sample contains clots |
Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the blood sample well with anti-coagulant to prevent formation of blood clots. |
Sample is too viscous |
Reduce the sample volume. |
Degradation of elutated DNA |
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Sample is old |
Always use fresh or well-stored sample for genomic DNA extraction. |
Buffer for gel electrophoresis contaminated with DNase |
Use fresh running buffer for gel electrophoresis. |
基因组DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi试剂盒
FABGK 000 |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒 |
4个准备。 |
蛋白酶K粉末 |
在室温(15~25℃)下保存2年。 |
FABGK 001 |
50个准备。 |
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FABGK 001-1 |
100个准备。 |
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FABGK 001-2 |
300个准备。 |
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FABGK 100 |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒 |
100个准备。 |
RBC裂解缓冲液 FATL缓冲液 FABG缓冲液 W1缓冲液 洗涤缓冲液(浓) 洗脱缓冲液FABG迷你柱 2ml收集管
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在室温(15~25℃)下保存2年。 |
FABGK 300 |
300个准备。 |
FABGK 002-S |
FavorPrep血液/培养细胞基因组DNA提取Midi试剂盒 |
2个准备。 |
蛋白酶K粉末 |
在室温(15~25℃)下保存2年。 除蛋白酶K粉外,贮存于4℃。 |
FABGK 002 |
20个准备。 |
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FABGK000-MAXI |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取Maxi试剂盒 |
2个准备。 |
Proteinase K Powder |
在室温(15~25℃)下保存2年。 |
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