Celltechgen CTG-MGD4766说明书

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Celltechgen CTG-MGD4766说明书

 

Detect Kit

 

· Model: CTG-MGD4766

 

细节：

– 检测套件

 

货号：CTG-MGD4766

 

试剂盒组分：

2毫升单克隆抗体 – ，R-PE共轭。

2毫升Anti-R-PE磁珠。

1 ml Bead释放试剂和1 ml Stop Buffer（可选）

 

描述

该套件用于隔离和检测 – ？使用磁珠磁性标记的细胞。首先，通过与R-PE和抗R-PE磁珠缀合的单克隆抗体标记细胞，在磁柱上正选择- +细胞，收集用于进一步的流式细胞术分析。珠子释放试剂和终止缓冲剂可用于从磁珠中释放具有抗体-R-PE的细胞。

 

目标特征

符号： –

基因编号：729816

Uniprot条目：Q04683

蛋白质名称：CXC趋化因子受体5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受体1同源物）（CD抗原CD185）       

生物：Mus musculus（Mouse）

 

目标功能

 

容量        

1 X 10 9个细胞

公式  

所有组分均以含有稳定剂和0.05％sodium azide的缓冲液供应。

存储和使用      

在2-8°C的温度下避光保存。不要冻结。到期日期显示在样品瓶标签上。该产品仅供研究使用，不适用于诊断程序。

 

一般议定书

 

开发检测试剂盒以用特异性抗原分离和检测靶细胞。筛选程序通过用针对特异性抗原的单克隆抗体直接磁性标记细胞，与R-PE和抗R-PE磁珠缀合，然后将标记的细胞保留在磁柱上，并且靶细胞释放并收集用于进一步的流式细胞术分析。

 

1.样品制备

· 当使用抗凝外周血或血沉棕黄层时，应通过密度梯度离心分离外周血单核细胞（PBMC）。

· 为了在密度梯度分离后除去血小板，将细胞沉淀重悬于缓冲液中，并在20℃下以200×g离心10-15分钟。小心吸出上清液。重复洗涤步骤。

· 使用组织或裂解的血液时，使用标准方法制备单细胞悬液。

· 死细胞可以非特异性结合磁珠。为了去除死细胞，我们建议使用密度梯度离心或死细胞去除试剂盒。

· 保持细胞冷却，并使用预先冷却的溶液。

 

2.磁性标签

· 以下给出的磁性标签卷多可达10个？总细胞。工作时少于10？细胞，使用与指示相同的体积。使用较高的细胞数时，相应地扩大所有试剂体积和总体积。

· 应滴定初级染料缀合的抗体以确定宜染色稀释度。染色不应该增加阴性群体的荧光强度。

1）     计算细胞数量。

2）     以300×g离心细胞悬浮液10分钟。*吸出上清液。

3）     每10 7个总细胞在80μL缓冲液中重悬细胞沉淀。

4）     加入20μl初级PE-缀合的抗体并充分混合，在2-8℃黑暗中孵育10分钟。

5）     每10小时加入1-2 mL缓冲液，清洗细胞以去除未结合的一抗。将细胞以300×g离心10分钟。

6）     *吸出上清液，每10 7个总细胞将细胞重悬于80μL缓冲液中。

7）     每10加入20μL抗PE磁珠？总细胞。

9）充分混合，在2-8℃下孵育15分钟。

10）每10升加入1-2 mL缓冲液洗涤细胞。将细胞以300×g离心10分钟，*吸出上清液。

11）重新悬挂10？细胞在500μL缓冲液中。注意：对于更高的单元格数，请相应地扩大缓冲区容量。

12）继续进行磁力分离。

 

3.用于检测的靶细胞的阳性选择

1）将色谱柱放在合适的分离器的磁场中。 

2）用适量缓冲液冲洗，准备色谱柱。

3）将细胞悬浮液施加到柱上。

4）收集未标记的细胞，用适量的缓冲液通过并洗涤柱子。执行洗涤步骤三次。          

5）从分离器中取出色谱柱并将其放在合适的收集管上。

6）移取适量的缓冲液到柱上并释放靶细胞用于进一步的流式细胞术分析。

 

 

 

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