Mynox® 支原体去除试剂
简要描述：Mynox是目前*可杀灭支原体的生物制剂 有效去除细胞培养及病毒保存中支原体的污染
详细介绍
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| 产品说明： |
| Mynox是目前*可杀灭支原体的生物制剂 有效去除细胞培养及病毒保存中支原体的污染 规格：2次，5次，10次 特点：
支原体去除试剂Mynox使用常见问题 Mynox说明书 |
| 所属公司：德国Minerva Biolabs公司产品 所属类别：支原体检测、去除、预防试剂 |
Mynox® 支原体去除试剂
1. 试剂及材料
1.1 试剂盒组分
操作手册
Mynox试剂：无菌、即用型溶液（PBS缓冲液），PH 7.4，220 µl/管
Cat. No. 10-0200 2 管
Cat. No. 10-0500 5 管
Cat. No. 10-1000 10 管
1.2 稳定性与保存
Mynox在有效期（见包装盒标签）内具有很强的稳定性。应于2-8°C保存。
运输过程中，应保持室温。
1.3 其他所需的试剂及设备
标准细胞培养设备
培养基、胎牛血清、PBS缓冲液、胰酶
无菌培养皿
Venor®GeM支原体检测试剂盒（Minerva Biolabs公司）
2. 应用及原理
不论从生物学还是经济学角度考虑，去除细胞培养中的支原体感染，对于基础研究、诊断和生物技术的生产都是至关重要的。应用抗生素处理是杀灭或抑制细胞培养中支原体污染的zui常用方法。一般来说，抗生素治疗不但不能有效持久地去除支原体，而且，抗生素还容易对细胞产生不良的细胞毒作用，并引起支原体菌株的耐药性。
目前，Mynox是*种也是*可杀灭支原体的生物制剂。实验证实，Mynox仅使用一次即可*有效的消除支原体。
Mynox取自枯草杆菌发酵后的提取物。由于支原体没有细胞壁，只有简单的质膜，因此，Mynox基于生物物理原理，只与支原体膜特异性结合，改变支原体膜的通透性，导致支原体破裂死亡，而细胞膜不与Mynox结合，从而，不会改变细胞的任何特性，故细胞毒性极低。支原体杀死后，细胞能够很快恢复其正常的生长与繁殖状态。
注意：Mynox仅限于基础研究使用。
3. 样品材料
3 .1 血清浓度的重要性
反应混合物中脂肪和蛋白质的浓度可影响Mynox消除支原体的活性，例如：胎牛血清的浓度。这些成分可阻止Mynox与支原体膜的结合。因此，消除细胞培养中的支原体，应使用特定的标准细胞培养基，例如：D-MEM或RPMI 1640培养基。如果使用Mynox消除污染细胞中的支原体，胎牛血清的*浓度为5%。如果使用Mynox消除病毒中的支原体，建议使用无血清的培养基。
3.2 Mynox的使用范围
由于Mynox不与细胞膜结合，因此，它不能消除细胞内的支原体污染。然而，支原体污染通常发生在细胞外，只有penetrans种属的支原体能够进入细胞内，但是，迄今为止，尚未有关于penetrans种属支原体引起污染的报道。另外，为了减小血清对消除支原体的影响，还需制定适用于消除高蛋白、高脂情况下的支原体污染的方案。
Mynox利用生物物理的方法，与支原体膜结合，因此，Mynox必须直接接触支原体，才能有效杀除。我们建议使用胰酶消化细胞，使细胞充分脱落分离，与Mynox充分接触，从而，更有效地杀除支原体。
3.3 Mynox是否对细胞有损伤
同其他消除支原体的产品相比，Mynox对于贴壁和非贴壁系细胞的影响不大。通过对众多细胞系的测试，我们发现治疗后的细胞，不但支原体被*杀除，而且，移种后的细胞仍然能够保持正常的高增殖率。
4. 说明
4.1 贴壁细胞系支原体的去除
4.1.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
在直径为6cm的无菌培养皿中，将污染细胞与Mynox混合
1. 加入2.8ml含有5%v/v胎牛血清的标准培养基
2. 加入Mynox 200 µl（1管）
3. 加入2 ml 细胞密度为1×104至 1×105的污染细胞
混合物总体积为5ml。
注意：
1．确保对单一细胞进行支原体杀除（显微镜下观察!）。可根据需要延长胰酶消化时间。
2．在加入污染细胞前，确保Mynox®已被添加在培养基中。将污染细胞直接加入到Mynox混合物中。
4.1.2 去除支原体
在正常细胞培养的条件下，将Mynox与污染细胞的混合物进行2个小时的培养，然后，弃去上清液，再加入标准的细胞培养基。将去除支原体后的细胞继续进行传代培养。
注意：
在污染细胞去除支原体期间，应经常观察Mynox对细胞的影响。如果发现细胞状态不佳，应立即停止反应，添加标准培养基，将Mynox混合物按1:5稀释。
4.2 悬浮细胞系支原体的去除
4.2.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
将污染细胞与Mynox混合在无菌离心管中
1. 加入1.6ml 0.125%的胰酶和5mM EDTA PBS缓冲液
2. 加入Mynox 200 µl（1管）
3. 转移1.6 ml含有10%v/v胎牛血清的标准培养基和细胞密度为1×104至 1×105的污染细胞
混合物总体积为3.4ml。
注意：
1．确保对单一细胞进行支原体杀除（显微镜下观察!）。可根据需要延长胰酶消化时间。
2．在加入污染细胞前，确保Mynox®已被添加在培养基中。将污染细胞直接加入到Mynox混合物中。
3．确保离心管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。
胰酶可防止细胞聚集。如果，去除支原体过程中，不需要使用胰酶进行细胞分离，可添加PBS缓冲液，以保证细胞与Mynox混合物的总体积为3.4 ml。
4.2.2 去除支原体
1. 室温下，轻轻摇匀混合物2小时。
2. 将细胞团离心5分钟 （600 x g） 并弃去上清液。
3. 在不含Mynox的培养基中将细胞重悬。
去除支原体更有效的方法是：将污染细胞在含有Mynox的培养基中培养1代。将污染细胞加入到5 ml含有5 % v/v 胎牛血清的培养基和150 µl Mynox的混合物中培养3天，然后，离心并弃去上清液，再继续在不含Mynox的培养基中进行传代培养。
注意：
在污染细胞去除支原体期间，应经常观察Mynox对细胞的影响。如果发现细胞状态不佳，应立即停止反应，添加标准培养基，将Mynox混合物按1:5稀释。
4.3 无包被病毒支原体的去除
4.3.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
冻存或新鲜的细胞以及不含细胞碎片的悬浮液均可进行支原体杀除。病毒的滴度不影响去除效果，将污染细胞与Mynox混合在15ml无菌管中：
将污染细胞与Mynox混合在无菌离心管中
1. 加入1ml不含胎牛血清的标准培养基
2. 加入Mynox 100 µl
3. 将125 µl病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中
混合物总体积为1.225 ml。
注意：
确保反应管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。
4.3.2 去除支原体
1. 将污染细胞与Mynox的混合物室温下培养2小时，并轻轻摇匀。
2. 在培养基中，将Mynox稀释为1:10时，反应结束。
在进行此步骤时，可以通过去除宿主细胞系的支原体污染，同时达到去除病毒中支原体污染的目的。zui后的体积应达到混合液体积的10倍。
注意：
在被支原体污染之前，首先要检测宿主细胞系是否有支原体污染。
4.4 包被病毒支原体的去除
包被病毒外层的脂质膜成分与支原体膜相似，也是Mynox结合的对象。根据使用Mynox的浓度和作用时间，这些病毒极易被Mynox杀除。为了能够*杀除支原体，预杀除支原体的病毒的滴度应高于106 TCID50。
4.4.1 污染细胞和Mynox混合物的准备
冻存或新鲜的细胞以及不含细胞碎片的悬浮液均可进行支原体杀除。将污染细胞与Mynox混合在15ml无菌管中：
1. 加入4.4ml不含胎牛血清的标准培养基
2. 加入Mynox 100 µl
3. 将0.5 ml病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中
混合物总体积为5 ml。
注意：
确保反应管中污染细胞与Mynox的混合物为液态。
4.4.2 去除支原体
将污染细胞与Mynox的混合物室温下培养2小时，并轻轻摇匀。在培养基中，将Mynox稀释为1:10时，反应结束。在进行此步骤时，可以通过去除宿主细胞系的支原体污染，同时达到去除病毒中支原体污染的目的。zui后的体积应达到混合液体积的10倍。
注意：
在被支原体污染之前，首先要检测宿主细胞系是否有支原体污染。这个支原体去除过程，可多次用于病毒株的杀除，以确保所有支原体已被杀除。
5. 支原体检测
在不添加抗生素的情况下，经Mynox去除的细胞培养物和病毒株应继续传代培养4代，然后，进行支原体污染的再测定。我们建议使用高敏感度的Venor®GeM支原体检测试剂盒（Cat.-No. 11-1025/1050/1100/1250），以测定支原体去除的效果。该试剂盒应用的PCR检测法，但是，去除支原体后，不宜立即采用PCR检测。因为，Mynox可改变支原体膜的通透性，使支原体破裂死亡，进而，达到杀除支原体的目的，同时，支原体DNA也会释放到培养基中，此时，应用PCR法检测，就可检到支原体DNA，从而，造成错误的阳性结果。在继续传代培养1-2代后，由于培养基的更换，细胞外不再含有支原体DNA。