Protein A Sepharose 4FF 产品使用说明书

——高IgG结合特异性 高流速 低蛋白A脱落

产品特点

特点	结合特异性强，基团脱落少	颗粒大小	50-160 μm
基质	4%的交联琼脂糖凝胶	推荐流速	50-300cm/h
配基	重组protein A	使用温度	常温
配基密度	6mg重组蛋白A/ml	pH范围	3-10
动态吸附载量	60mg人IgG/ml	保存温度	+4~8℃
蛋白A残留	小于3ng蛋白A/mg IgG	保存液体	20%乙醇

 

Protein A Sepharose 4FF ，上海金畔生物专业代理，：

 产品介绍

Protein A sepharose介质是经过我们公司长期开发，在公司生产的native protein A 的基础上精致而成。通过Protein A Sepharose 4FF，可分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。本产品相对同类产品具有如下优势：

1、偶联条件温和，更好的保持了protein A的构象，所以抗体载量高，同体积的介质，相同规模的纯化设备，相同体积介质，抗体的产量明显高于用同类产品，大大的降低了抗体药物生产成本。

2、非常稳定，不易脱落，用其生产的抗体中protein A的残留比同类产品的更少。

3、公司的Protein A 以及Protein A sepharose的生产都是在清洁车间生产，符合制药企业生产需求。

4、公司生产的Protein A sepharose使用寿命长，常规条件下能够重复使用100次以上。

 

 

使用说明

（1）缓冲液的准备：

平衡缓冲液：纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的，部分参照如下： 抗体种类	平衡缓冲液成分
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b	10mM 磷酸盐缓冲液，150mM NaCl，pH 7.21
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3	50mM Tris-Cl，3M NaCl，pH7.8-8.5

 

（2）样品的准备

样品上柱前先用平衡缓冲液稀释5至10倍，从而确保样品液的成分和pH与平衡缓冲液相近。如果上样体积过大，可以采取调节上样液pH和盐浓度的方式，使样品的pH和电导与平衡液接近，使样品中的缓冲体系与平衡缓冲液相同。

细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。

样品在上柱前也需0.45μm微孔滤膜过滤。

（3）操作步骤

a） 填料装柱后，用纯水流洗至少3个柱管体积，以冲掉乙醇，再用平衡缓冲液流洗至少5个柱管体积来平衡柱子。

b） 将样品上柱，上样流速控制在60cm/h。

c） 平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，把UV洗至基线。

d） 洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，立即用中和缓冲液中和到中性。

e） 再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于+4-8℃保存。

操作中如果没有在线的蛋白监测系统，洗脱峰时可以分阶段

收集，zui后根据测定结果合并活性部分。