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Agrisera公司于1980年在瑞典成立,Agrisera公司一直致力于发展科学研究所需的蛋白抗体研发与销售,产品主要有:多种植物蛋白酶抗体,呼吸作用(线粒体)相关蛋白的多克隆抗体,Arabidopsis thaliana,Chlamydomonas reinhardtii ,以及其它一些较为稀有的蛋白抗体
ADGP | ADP-glucose pyrophosphorylase
ADGP | ADP-葡萄糖焦磷酸化酶
AS11 1739 | 克隆性:多克隆 | 主体:兔子 | 反应物种:A.thaliana,C. reinhardtii,H. vulgare,Polytomella sp。,Z. mays
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应用信息 | ||
推荐稀释 |
1:1000到1:5000取决于ECL灵敏度(WB) |
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预期| 明显MW |
49.4 | 52 |
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确认反应性 | 拟南芥,Heterum vulgare,Zea mays | |
预测反应性 |
双子叶植物包括:Beta vulgaris,Solanum lycopersicum,Vitis vinifera,单子叶植物,包括:Oryza sativa,Triticum aestivum,藻类:莱茵衣藻,蓝细菌和其他细菌(衣原体,平面菌纲,Proteobacteria,螺旋体和verrucomicrobia)。 |
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没有反应 |
目前已知无预测反应性的确认例外 |
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附加信息 |
使用2D凝胶电泳已经排除了该抗体对Rubisco的交叉反应性。 |
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所选参考 |
在可用时添加,2014年7月发布抗体。 |
应用实例
用蛋白质提取缓冲液PEB(AS08 300)提取10μg来自拟南芥 (1),Hordeum vulgare (2),Zea mays (3)总蛋白的总蛋白。样品用1X样品缓冲液(NuPAGE LDS样品缓冲液(Invitrogen),补充有50mM DTT并在70℃加热5分钟,并在加载前保持在冰上,蛋白质样品在NuPAGE4-12%Tris-双凝胶(Invitrogen)LDS-PAGE,并使用槽转移在PVDF上印迹1小时至1.5小时。在2%封闭试剂(GE RPN 2125; Healthcare)或溶解于20mM Tris的5%非脂肪乳中转移后,在室温搅拌下,将含有0.1%(v / v)吐温-20(TBS-T)的137mM氯化钠pH7.6培养1小时,将印迹以1:5000稀释(封闭试剂)在室温下搅拌1小时,倾出抗体溶液,短暂漂洗2次,然后用TBS-T在室温下搅拌洗涤1×15分钟和3×5分钟,将印迹在二抗(抗兔IgG辣根过氧化物酶偶联,推荐二抗AS09 602)稀释t 在室温下搅拌1〜25 000封闭试剂1小时。印迹如上所述洗涤。使用TMA-6(Lumigen)检测试剂根据制造商的说明书将印迹显影5分钟。使用CCD成像仪(FluorSMax,Bio-Rad)和Quantity One软件(Bio-Rad)获得印迹图像。
进行2D凝胶电泳以排除该抗体对Rubisco的交叉反应性
将WT-Col-0 拟南芥叶子在液氮中冷冻,将可溶性蛋白质在含有50mM HEPES,5mM NaCl和10mM MgCl 2的缓冲液中提取。通过非还原蓝色天然PAGE(5-12.5%)分离10μg和17μg天然蛋白质复合物,然后通过还原SDS-PAGE(15%用6M尿素)在第二维中进一步分离,并吸印1小时至使用Höefer半干吸墨纸的PVDF膜。在室温(RT)搅拌下,用TTBS中的2%牛奶将斑块封闭3小时。将印迹在+ 4℃下以1:2000稀释过夜孵育一次抗体。倾析抗体溶液,并在室温下用TTBS在搅拌下将印迹洗涤3×5分钟。将印迹在室温下搅拌下,在1%乳/ TTBS中稀释至1:25000的二抗(来自Agrisera AS09602的抗兔IgG 抗性马匹萝卜过氧化物酶)中温育2小时。印迹在TTBS中在TTBS中洗涤3×5分钟,并在室温下用TBS洗涤1×5分钟,并用ECL根据制造商的说明书显影5分钟。曝光时间为30秒。
来自芬兰图尔库大学的Lauri Nikkanen感谢
藻类样品的
蛋白质印迹来自莱茵衣藻菌株CC-124 (1),衣藻衣藻菌株CC43-48(STA6)(2)和Polytomella sp。的总蛋白质(40μg)Pringsheim 198.80 (3)在5-12%丙烯酰胺/ 6M尿素SDS-PAGE上分离,并印迹到硝酸纤维素膜上。在搅拌下,在含有5%低脂奶的T-TBS(0.1%Tween in Tris Buffer Saline)中,在室温(RT)下1小时封闭印迹。将印迹在1:2 500的稀释度下在*抗体中在搅拌下在室温下孵育1小时。倾析抗体溶液,并在T-TBS,RT搅拌下将印迹洗涤两次15分钟。将印迹在稀释至1:25000的二次抗体(山羊抗兔IgG,偶联的辣根过氧化物酶,Agrisera,AS09602)中,在室温下搅拌孵育 1小时。如上所述洗涤印迹并使用自制的增强化学发光系统(Durrant,Nature 346:297,1990)进行显影。使用CCD成像仪(ImageQuant LAS4000)获得印迹图像。