bio-helix 基因组DNA分离双试剂盒

 

PureDireX – PDC02-0100 / NA015-0100

基因组DNA分离双试剂盒（基于柱）

尺寸：100 rxns

 

注意：PureDireX /纯化试剂盒/提取试剂盒/ NA015-0100 /基因组DNA 

 

PureDireX基因组DNA分离双试剂盒（基于柱）

DUAL基因组DNA分离试剂盒（血液/培养细胞/真菌）结合了试剂系统和离心柱系统。该试剂盒专门用于从全血，冷冻血液，血沉棕黄层，培养的动物/细菌细胞和真菌中分离基因组DNA。这种*的试剂系统可确保样品中的总DNA具有高产量和高质量。旋转柱系统设计用于纯化或浓缩先前已用试剂分离的DNA产物。整个过程可在1小时内完成，无需苯酚/氯方萃取。纯化的DNA适用于PCR或其他酶促反应。
 

样品

高达300μl的全血
高达200μl的冷冻血液
高达200μl的血沉棕黄层
培养的动物细胞（多1 x10 ^ 7）
培养的细菌细胞（多1 x10 ^ 9）
真菌细胞（向上）到5 x 10 ^ 7）

格式化
试剂和旋转列

产量
高达50微克

操作时间
60分钟内

洗脱体积为
50〜200μl

[PureDireX / PDC02-0100 / Bio-Helix]

• 协议

▍新鲜全血或淡黄色外套

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.在EDTA-Na2处理的收集管（或其他抗凝血剂混合物）中收集血液。
2.将多300μl血液或200μl血沉棕黄层转移至无菌1.5 ml微量离心管中。
3。加入900μlBufferRL并通过倒置混合。
4.将试管在室温下孵育10分钟（在孵育期间倒置两次）。
5.以4,000 xg离心5分钟。
6.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。

第2步 – 裂解
1。将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，请执行此可选步骤。）
3。向样品裂解物中加入5μlRNaseA（10mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 DNA补液
1。加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。
步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动 。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

▍培养的哺乳动物细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将培养的哺乳动物细胞（多10 ^ 7）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以6,000 xg离心1分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。

步骤2 – 裂解
1.将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA
沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

柱系统（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

▍Gram-阴性细菌细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将培养的细菌细胞（多10 ^ 9）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以12,000 xg离心1分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。

步骤2 – 裂解
1.将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案

*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回2 ml收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

 

▍Gram-Postive细菌细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将培养的细菌细胞（多10 ^ 9）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以12,000 xg离心1分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于100μl溶菌酶缓冲液中。
4.在室温下孵育20分钟。
 

第2步 – 裂解

1.向步骤1的重悬浮细胞中加入300μlBufferCL，并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3 。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案

*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回2 ml收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

 

▍真菌细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将真菌细胞（多10 ^ 8）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以6,000 xg离心5分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于600μl山梨糖醇缓冲液中。
4.加入200U裂解酶或酶解酶。在30°C孵育30分钟。
5.以2,000 xg离心混合物10分钟以收获原生质球。
6.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。
 

步骤2 – 裂解
1.将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。
 

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。
 

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案

*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回2 ml收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。