产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
312-01791 | Ethachinmate 共沉淀剂 |
0.2mL | – | – |
318-01793 | Ethachinmate 共沉淀剂 |
0.02mL | – | – |
- 产品特性
- 相关资料
- Q&A
- 参考文献
Ethachinmate共沉淀剂
Ethachinmate
◆原理
共沉淀剂Ethachinmate是基因工程学的标准时机。作为畅销产品,效果显著。
Ethachinmate适用于核酸(DNA与RNA)乙醇或isopropanol沉淀时的丙烯酰胺系高分子载体溶液,在盐类存在的情况下(例如 >0.1mol/L Sodium Acetate)加上Ethachinmate进行酒精沉淀,能得到如下优点。
◆优点・特色
● 可回收微量核酸
可定量性回收20ng/mL以上的DNA(>100个碱基对)及(>120个碱基)。
● 乙醇沉淀迅速
无需-20℃或-80℃孵化,添加乙醇后可直接离心。
● 酶反应无障碍
回收的核酸,在水及缓冲液中容易溶解。混在一起的Ethachinmate完全不阻碍酶反应。
● 沉淀可观察到
因为Ethachinmate自己根据究竟沉淀形成沉淀,无需担心微量核酸冲洗了重要样品。
无DNase,RNase活性测试剂
用一下DNase及RNase free方法可确认是否含有Ethachinmate
DNase实验:向1μgλ/Hin d III 中加入3μLEthachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时候,进行琼脂糖凝胶电泳,图像确认无变化。
RNase实验:向2μg 16S及23S的rRNA中加入3μL Ethachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时后,进行琼脂糖凝胶电泳,图像确认无变化。
◆使用方法
DNA或者RNA溶液(100μL)
↓←3 mol/L Sodium Acetate(添加),3,3μL*1)
↓←Ethachinmate 1μL*2)
↓←涡流
↓←2~2.5倍量的乙醇
↓涡流*3)
↓10kgxg室温下反应5分钟*4)
沉淀*5)
*1)(氯)盐的最终浓度必须在0.1mol/L以上
*2)每100μL DNA或RNA溶液中加入1μL Ethachinmate。但溶液量为300μL以上时,加入3μL可达到饱和。
*2)而且再次进行上述操作时,无需添加Ethachinamte。 (若反复添加Ethachinmate会导致DNA溶液变
*2)得黏稠,影响到后面的操作。)
*3)进行充分混匀,可实现微量DNA的定量回收。
*4)不必进行冷却
*5)沉淀可目测。溶解于其他缓冲液等中,可直接作为各种酶底物使用。而且,必须用70%的乙醇进行洗涤。
Q: 有没有DNase,Rnase杂质?
A: 没有。Ethachinmate用以下的方法可以确认无DNae、RNase活性。
Dnase 实验:向1μg的/Hin d III中加入3μL Ethachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时候,进行琼脂
糖凝胶电泳,图像确认无变化。
RNase实验:向2μg 16S及23S的rRNA中加入3μL Ethachinmate,在37℃的恒温箱中放置16小时后,进
行琼脂糖凝胶电泳,图像确认无变化。
Q: 可以使用RNA回收吗?
A: 没有问题。
Q: 高效回收的核酸浓度和核酸链长度是多少?
A: 可回收几乎所有的20ng/ml 以上的DNA(100bp以上)及RNA(120 base以上)。
Q: 260nm的吸光度会影响定量吗?
A: 无影响。
Q: 100μL DNA溶液对应加入1μL Ethachinmate。若DNA溶液少于100μL,应该怎样做才好?
A: 请加入1μL Ethachinmate。为了DNA沉淀可目测,需要1μL以上的Ethachinmate。另外,3M Sodium
Acetate及1μL的Ethachinmate。
Q: 300μL以上的DNA溶液,Ethachinmate的添加量是多少?
A: DNA溶液为300μL以上,无论DNA溶液的量是多少,都请加入3μL Ethachinmate。无需加入过量的Eth-
achinmate。另外,3M Sodium Acetate请按此比例换算适量添加。
例:DNA溶液为600μL,则加入19.8μL的3M Sodium Acetate及3μL的Ethachinmate
Q: DNA溶液进行2次以上乙醇沉淀时,最好第二次以后也每次加上Ethachinmate吗?
A: Ethachinmate添加一次无需再添加,如果重复添加Ethachinmate,DNA溶液会变得黏稠,将阻碍以后的
操作。
Q: 冷冻时,会不会影响Ethachinmate的效果?
A: 不会
Q: 高压处理会不会影响Ethachinmate的效果?
A: 不会
Q: 如果用苯酚/氯仿处理含Ethachinmate的DNA溶液,会不会影响Ethachinmate的效果?
A: 不会
Q: 对电泳模型有没有影响?
A: 没有,但根据电泳条件的不同,数十kbp以上的DNA会产生宽频带条。
Q: 对限制性内切酶反应有没有影响?
A: 没有。
Q: 对T4 DNA Ligase反应有没有影响?
A: 没有。
Q: 对AMV Reverse Transcroptase的cDNA合成反应有没有影响?
A: 没有。
Q: 对使用Taq DNA Polymerase的PCR反应有没有影响?
A: 没有。
Q: 对Klenow Flagment反应有没有影响?
A: 没有。
Q: 对大肠杆菌的转化有没有影响?
A: 没有。
Q: 对in vitro组装有没有影响?
A: λ 噬菌体的in vitro组装效率稍微下降。
Q: 加入Ethachinmate,乙醇沉淀会形成核苷酸沉淀吗?
A: 使用8mer及17mer的的低聚核苷酸进行实验,与是否添加Ethachinmate无关,回收率没有变化。
Q: 在含有甲酰胺的杂交溶液中有无变性吗?
A: 无变性。
Q: 对blotting有没有影响?
A: 没有。
Q: 对序列反应有没有影响?
A: 不影响使用ABI Prism 377的周序列反应。对脱氧发的序列反应也没有影响。
Q: 添加Ethachinmate是否有助于从管中脱落沉淀?
A: 要看管的材质。比如Eppendorf公司制的Safe-Lock管有容易脱落的倾向。