本制品是2 Step Real Time RT-PCR用的理想反转录反应试剂。5×PrimeScript RT Master Mix中含有定量RT-PCR的反转录反应所需的所有试剂 (PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、Random 6 mers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer),加入模板RNA和水即可迅速进行反应。使用具有较强延伸能力的PrimeScript RTase,与制品PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)(Code No.: RR037Q/A/B) 相同,可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用模板cDNA。 本制品合成的cDNA可以用于嵌合法和探针法qPCR分析,可以根据实验目的与TB Green® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)* 、TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B)* 和Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 等定量试剂配合使用,能够进行高性能的基因表达分析。 |
*:Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。 产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉! |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 试剂盒特长 |
1. 制品为预先混好的Premix形式,只需加入模板RNA和水便可以开始反应。 2. 可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。 3. 使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer 2种反转录引物,可以合成适合Real Time PCR用cDNA。 4. Real-time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR),将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。 |
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■ 注意事项 |
1. 5X PrimeScript RT Master Mix在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于5X PrimeScript RT Master Mix粘度高,用移液枪慢慢反复吸打充分混匀后使用。 2. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。 3. 本制品中已经加入了反转录Primer(Oligo dT Primer 和Random 6 mers),如果要使用Gene Specific Primer进行反转录反应,则不能使用本制品。 |
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Technote: |
An efficient method for quantification of human gene expression levels using PrimeScript reverse transcriptase |
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Monitoring siRNA knockdown: Quantifying transient knockdown of LEDGF/p75 in docetaxel-resistant prostate cancer PC-3-DR cells |
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