| ■ 制品说明 |
| 酵母双杂交载体 |
pGBKT7是酵母双杂交bait表达载体，旨在表达GAL4 DNA结合结构域（DNA-BD, 1-147 aa）与bait蛋白质的融合蛋白质。融合蛋白质在ADH1启动子下高水平表达，同时融合蛋白质含有一个c-Myc表位标签。为了促进体外转录和翻译，在pGBKT7的GAL4 DNA-BD和表位标签之间添加了T7启动子 。
· pGADT7 ——酵母双杂交 Prey 载体
pGADT7是酵母双杂交表达载体，旨在表达GAL4激活结构域（AD, 768-881 aa）与目的蛋白质的融合蛋白质。融合蛋白质在全长ADH1启动子下高水平表达，同时融合蛋白质含有一个血凝素（HA）表位标签。为了促进体外转录和翻译，在pGADT7的GAL4 AD和表位标签之间添加了T7启动子（1,2）。
· pBridge ——三杂交bait载体
pBridge载体与基于GAL4的双杂交系统组合，可以用于研究三个蛋白质之间的相互作用。在Matchmaker Gold系统中，pBridge相当于替代了pGBKT7。由于它的两个不同的多克隆位点，pBridge载体可以表达一个DNA-BD融合蛋白质和另一个在bait和prey之间起“Bridge”作用的蛋白质。
与标准双杂交分析相比，三杂交系统更有可能用于研究更加复杂的蛋白质之间的互作。系统中的第三个蛋白质可以通过多种方式参与互作：
1. 作为桥梁，连接两个原本没有直接互作的蛋白质，使它们发生互作。
2. 稳定两个蛋白质之间的弱相互作用。
3. 修饰或抑制一个或两个蛋白质（3）。
4. 抑制双杂交互作。
额外蛋白质的表达受甲硫氨酸诱导型启动子调控——甲硫氨酸不存在的条件下蛋白质才能够表达。蛋白质的表达与否由外源培养基中是否含有甲硫氨酸决定，而第三个蛋白质的表达效应则由报告基因或营养标记基因的表达来指示。我们提供的酵母培养基（Code. No：630430 &630429）缺少甲硫氨酸，非常适用于携带pBridge载体的酵母菌株。 |
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| ■ 制品特点 |
1. 非常受欢迎并被广泛使用的酵母双杂交载体。
2. pGBKT7和pGADT7是Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System的组分。
3. pBridge表达双杂交之外的第三个蛋白质。
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| ■ 制品用途 |
1. 酵母双杂交筛选
2. 酵母三杂交筛选 |
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| ■ 文献 |
1. Tirode, F. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:22995–22999.
2. Brachmann, R. & Boeke, J. (1997) Curr. Opin. Biotechnol. 8:561–568.
3. Osborne, M. et al. (1995) Biotechnology 13:1474–1478. |
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