产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
291-78501 | EpiSight™BisulfiteConversion Kit Ver.2 | 20次 | 遗传因子研究用 | - |
293-78701 | EpiSight™ BisulTaq™ DNA Polymerase, recombinant, Solution Ver.2 | 20次 | 遗传因子研究用 | - |
- 产品特性
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- Q&A
- 参考文献
EpiSightTM Bisulfite Conversion Kit Ver.2
EpiSightTMBisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2
Enhanced Bisulfite Reaction抑制因亚硫酸氢钠反应的DNA分解,扩增长链长度。
通过添加专利产品Bisulfite溶液和反应促进剂(Enhancer),能抑制模板DNA的分解,能让胞嘧啶转化为尿嘧啶的效率大幅度上升。使用离心柱能使DNA纯化操作更加简便。
结合专用的Taq DNA Polymerase,即使是亚硫酸氢钠反应后,PCR扩增比较困难的碱基序列也能稳定且高效地扩增。
◆特点
● 离心柱操作简单
● 专利的Enhancer抑制DNA分解
● 有效扩增富含CpG的序列
● 热启动聚合酶防止非特异性扩增
有以下需求的可以考虑使用本产品
● 扩增长链进行高效分析
● 非甲基化胞嘧啶不转换为尿嘧啶的情况
● 甲基化胞嘧啶转换为尿嘧啶的情况
● 想提高PCR扩增效率
◆试剂盒内容(kit 内容)
EpiSightTM Bisulfite Conversion Kit Ver.2(20次)
Bisulfite solution |
11.8mL×1 |
Enhancer |
100µL×1 |
吸附缓冲液 |
10mL×1 |
洗涤液 |
4.8mL×1 |
Desulfonation buffer(脱磺缓冲液) |
1mL×1 |
洗脱缓冲液 |
500µL×1 |
离心柱 |
20个 |
EpiSightTMBisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2(20次)
BisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2 |
10µL×1 |
10×反应缓冲液 |
100µL×1 |
dNTPs溶液(各 2mmol/L) |
100µL×1 |
◆使用例1
以小鼠ES细胞(胚胎干细胞)和M1细胞(白血病衍生细胞)的基因组DNA为模板,经过亚硫酸盐处理后,PCR扩增干细胞未分化标记FGF4启动子区。PCR扩增的链长是521bp,CpG二核苷酸数为61位,对于亚硫酸氢钠PCR扩增链较长,因为 GC含量高,被认为是对三维结构影响较大的区域。
ES细胞有干细胞未分化标记FGF4的mRNA表达,启动子区为非甲基化状态;M1细胞没有用于体细胞分化的Fgf4的mRNA表达,被认为启动子区处于甲基化状态。
● 样本:小鼠ES细胞和小鼠M1细胞的基因组DNA、
● PCR扩增链长:521bp(小鼠Fgf4启动子区)
● CpG:61位
● PCR扩增区域GenBank Accession No.
● AC_149593 : 230224–230744
结果
ES细胞和M1细胞的PCR扩增产物在克隆后,得到分析11个样本的碱基序列。小鼠ES细胞的Fgf4启动子区为非甲基化状态。小鼠M1细胞的Fgf4启动子区为甲基化状态。
◆使用例2
以Lambda DNA为模板,通过使用该试剂盒和DNA聚合酶在Bisulfite反应后,扩增910bp目的区域,分析碱基序列。Lambda DNA中所有的胞嘧啶都是非甲基化,Bisulfite反应后全部被转化为尿嘧啶,预测PCR扩增产物中不存在胞嘧啶。
● 样本:Lambda DNA
● 非甲基化胞嘧啶:150个
● PCR扩增链长:910pb
● PCR扩增区域GenBank Accession No NC_001416 : 26062–269
结果
下图所示,不存在胞嘧啶,150处的胞嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。
以往的Bisulfite法中,DNA分解严重,条件设置困难,本产品能简单地成功实现900bp以上的PCR产物扩增。