本酶是噬菌体T7 DNA编码的酶,以含有T7启动子序列的双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。本酶对T7启动子序列具有高度特异性,不能识别其它生物来源的启动子。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 起源 |
Escherichia coli carrying the plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase gene. |
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■ 性质 |
1. 分子量:约98,000。 2. 亚单位:单一的多肽。 3. 最适pH:pH8.0。 4. 辅因子:Mg2+(最适浓度:8 mM),还原剂 (5 mM DTT)。 5. 激活剂:2 mM亚精胺 (4 mM亚精胺与DNA形成共沉淀)。 6. 抑制剂:NEM(10-4 M)、PCMB(5×10-8 M)。 |
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■ 活性定义 |
在37℃、pH8.0的条件下,1小时内使1 nmol的 [3H] GMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位(unit)。 |
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■ 用途 |
1. 合成单链RNA。 2. 合成高特异性RNA探针。 3. 合成siRNA前体。 4. 制作RNA剪接反应 (RNA Splicing) 的前体。 5. 以帽类似物 (Cap analog) 为引物,制作Capped mRNA。 |
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■ 使用注意 |
1. 为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。 2. 缓冲液中的亚精胺与核酸结合可能形成不溶物。建议最后加入模板DNA。 |