T4 DNA Polymerase酶试剂盒Takara

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T4 DNA Polymerase
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Takara 2040A T4 DNA Polymerase 100 U ￥261 T4 DNA Polymerase T4 DNA Polymerase T4 DNA Polymerase
Takara 2040B (A × 5) T4 DNA Polymerase 100 U × 5 ￥1,172 T4 DNA Polymerase T4 DNA Polymerase T4 DNA Polymerase
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■ 制品内容
T4 DNA Polymerase (5 U/μl) 100 U
10X T4 DNA Polymerase Buffer 1 ml
0.1% BSA* 1 ml
   
* BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。
 
■ 制品说明
在模板及引物存在的条件下，催化与模板互补的脱氧核苷酸依次选择性地连接在引物的3′-OH末端上的反应。本酶还具有单链DNA特异性的3′→5′外切核酸酶活性，该活性比Klenow Fragment强100～1,000倍。本酶没有5′→3′的外切核酸酶活性。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 起源
Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T4 DNA polymerase gene
 
■ 活性定义
以合成的Poly (dA-dT) DNA为摸板/引物，在37℃、pH8.8条件下，30分钟内使10 nmol的dATP和dTTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为1个活性单位 (U)。
 
■ 用途
1. 利用较强的3′→5′的外切核酸酶活性，通过置换合成从DNA片段的3’末端进行标记。
2. DNA末端的平滑化。
3. 通过引物延伸法解析mRNA转录的起始点。
 
■ 使用注意
1. 本酶的最适pH为8-9，在pH7.5及pH9.7时活性降低50%。
2. 活性的表达需要Mg2+的存在。为了获得较大活性，还需要SH基的还原剂存在。
3. 整个反应体系中的离子强度超过100 mM时活性将被抑制。
4. 本酶易受模板DNA高级结构的影响，T4 gene 32产物可以显著提高聚合酶活性，而3′→5′的外切核酸酶活性则完全被抑制。