本酶在DNA模板和引物存在的条件下,选择性地催化底物dNTP沿5’→3’方向合成与模板互补的DNA。本酶是从大肠杆菌中纯化得到,其中克隆了2/3的E.coli DNA polymerase I基因片段 (3’端计算) 。因此具有3’→5’外切酶活性但是没有5’→3’外切酶活性。2140AK/BK制品是Kilo-Sequencing Deletion Kit(Code No.: 6030)的组份之一。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 用途 |
1. 双脱氧法DNA序列测定 (Sanger法)。 2. 双链DNA 5’突出末端的平滑化。 3. 寡核苷酸定向诱变 (Oligonucleotide directed mutagenesis) 中双链DNA的合成。 4. 使用随机引物进行DNA标记。 |
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■ 使用注意 |
1. 本酶有高度稳定性,稀释时不失活,但剧烈搅拌会失活。 2. 由于不含有5’→3’的外切核酸酶活性,因此不表现切口平移活性。适合双链DNA末端以及缺口 (Gap) 的修复。 3. 与T4 DNA Polymerase相比,对模板高级结构的抵抗性能较好。 4. 由于对DNA的亲和性较强,过量使用易发生凝集作用 (Aggregation) 从而抑制反应进行。 5. 若用于5’突出末端的修饰时,补平后有时会多加一个碱基。 6. 与E.coli DNA Polymerase I相同,ddNTPs的掺入不受底物抑制。 |
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