T4 DNA Ligase酶试剂盒Takara

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T4 DNA Ligase
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Takara 2011A T4 DNA Ligase 25,000 U ￥130 T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase
Takara 2011B (A × 5) T4 DNA Ligase 25,000 U × 5 ￥585 T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase
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■ 制品内容
T4 DNA Ligase (350 U/μl) 25,000 U
10X T4 DNA Ligase Buffer 1 ml
 
■ 制品说明
本酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需Mg2+和ATP作辅因子，分子量为62,000，最适反应pH为7.6。本酶可以催化粘性末端之间和平滑末端之间的DNA的连接。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 起源
Escherichia coli carrying the plasmid that encodes the gene of T4 DNA ligase
 
■ 活性定义
在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。
本酶的1 unit相当于在含有6.6 mM MgCl2，10 mM DTT，66 μM ATP和3.3 μM [32P]-Na4P2O7的66 mM Tris-HCl (pH7.6) 中发生ATP-PPi交换反应的0.008 Weiss Unit。
 
■ 用途
1. DNA片段和载体DNA的连接。
2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
 
■ 注意事项
连接反应因末端碱基序列的不同而反应速度各异，一般有下列倾向 (由快至慢)：
突出末端：Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I
平滑末端：Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I
          EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I
其中连接Hind III 末端的速度约为连接Sal I 末端速度的10～40倍；
而连接Hae III 末端的速度约为连接Sma I 末端速度的5～10倍。