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■ 制品内容 |
E.coli JM109 Competent Cells |
100 μl × 10 |
pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) |
10 μl |
SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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*SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
0.5% |
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Yeast extract |
10 mM |
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NaCl |
2.5 mM |
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KCl |
10 mM |
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MgSO4 |
10 mM |
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MgCl2 |
20 mM |
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Glucose |
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■ 制品说明 |
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出E.coli JM109 Competent Cells。 由于E. coli JM109 Competent Cells含有F' 质粒,可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞,也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时,重组体可以利用感受态细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性,通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside |
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■ 细胞浓度 |
1-2×109 bacteria/ml |
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■ Genotype |
E. coli JM109: recA1 , endA1 , gyrA96 , thi-1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ(lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZΔM15] |
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■ 保存 |
-80℃。 注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pBR332 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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■ 转化效率 |
转入1 ng 的pBR322,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pBR322 |
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■ 注意事项 |
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 |
2. 可使用1.5 ml的microcentrifuge tubes代替14 ml的圆底tubes (BD company Code: 352059 或 352057等),但效率可能会降低。 |
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入的高纯度DNA样品不超过10 ng。否则转化效率会降低。 |
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时,适当调整反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒,而不是45秒。 |
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。 |
·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。 |
·φ b-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。 |
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6. YT soft agar: |
Ingredient |
per 100 ml water |
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Tryptone |
0.8 g |
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Yeast extract |
0.5 g |
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NaCl |
0.5 g |
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用1 N NaOH调整pH7.6,添加agar至浓度为0.6%,并高压灭菌。 |
7. 制备宿主细胞。 |
8. L-plate: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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用1 N NaOH调整pH到7.5,加入agar至浓度为1.5%,并高压灭菌。 |
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9. 当加入X-Gal或IPTG时,按照以下方法操作: |
·将100 mM IPTG按100-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium 中,若使用soft agar,比例为 25 μl/3 ml。 |
·将20 mg /ml X-Gal(溶解于二甲基甲酰胺)按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中,若使用soft agar,比例为50 μl/3 ml。 |
10. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
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