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■ 识别位点 |
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■ 制品内容 |
□ 附带试剂 |
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10X QuickCut Buffer |
500 μl |
10X QuickCut Green Buffer |
500 μl |
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■ 制品说明 |
□ 起源:Proteus vulgaris |
□ 反应温度:37℃ |
□ 活性检测:1 μl QuickCut限制酶在50 μl 1X QuickCut Buffer或1X QuickCut Green Buffer的反应体系中,在37℃条件下,经过5 min反应,将1 μg λ DNA完全消化所需要的酶量。 |
□ 活性测定用底物:λ DNA |
□ Star活性:Mn2+存在条件下,识别序列会发生变化 |
□ 质量控制: 1) 功能检测: 在1 μg线性DNA中加入1 μl QuickCut限制酶,在50 μl反应体系中,37℃保温5 min,能完全消化线性DNA。 2) Star Activity Test: 在1 μg DNA中加入1 μl QuickCut限制酶,进行16 hr酶切反应,然后进行琼脂糖电泳,DNA片段的电泳谱带不发生变化。 3) Labeled Oligonucleotide Assay (LOA) Test: 在荧光标记的寡核苷酸中加入1 μl QuickCut限制酶,37℃保温1 hr,分解率小于10%。 |
□ 甲基化的影响:受CG methylase的影响,但不受dam metyhlase的影响。 |
□ 使用注意: 1) 因该酶切出的突出末端比一般的2个碱基突出末端的连接效率低,所以必须使用平滑末端的连接条件。 2) 不建议进行16 hr以上酶切,易导致星活性。 3) 使用QuickCut限制酶进行双酶切或多酶切反应时,加入限制酶的总体积不能超过反应体系的1/10量;如果各酶的反应温度不同,建议按低温到高温的顺序加入相应的QuickCut限制酶进行分步酶切反应。 4) 10X QuickCut Green Buffer可能会干扰酶切产物的荧光分析。因此,酶切产物荧光分析检测时推荐使用无色的10X QuickCut Buffer。 5) 10X QuickCut Green Buffer如出现沉淀,室温下振荡5分钟可使沉淀完全溶解,不影响使用。 |
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