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| ■ 制品内容 |
| Brevibacillus Expression System II (Code No.: HB200) |
| 1、Expression Vectors |
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| pNY326 DNA(Code No. HB111) |
10 μg |
| pNCMO2 DNA(Code No. HB112) |
10 μg |
| 2、Control Vector |
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| pNY326-BLA DNA(Code No. HB114) |
1 μg |
| 3、Competent Cells |
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| Brevibacillus Competent Cells |
100 μl × 10 |
| MT medium |
1 ml x 10 |
| Solution A |
1 ml |
| Solution B |
1 ml x 2 |
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| Limited Use Label License: [L39] |
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| 请先确认产品专利信息，订购时请填写专利确认书。 |
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| ■ 保存 |
| Expression Vectors：pNY326 DNA, pNCMO2 DNA |
-20℃ |
| Control Vector：pNY326-BLA DNA |
-20℃ |
| Competent Cells |
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| Brevibacillus Competent Cells |
-80℃ |
| MT medium, Solution A, B |
-80℃ |
| His-Tag Fusion Expression Vectors： |
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| pNC-HisT DNA (Code No. HB121) |
-20℃ |
| pNC-HisF DNA (Code No. HB122) |
-20℃ |
| pNC-HisE DNA (Code No. HB123) |
-20℃ |
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| ■ 制品说明 |
Brevibacillus (Bacillus brevis ) Expression System是能够高效表达分泌型和优良蛋白质的表达系统，并能生产大量的异源蛋白质。本系统具有如下优点，尤其适用于生产分泌型蛋白质。
·生产大量的胞外分泌型蛋白质；
·无蛋白酶活性；
·生产有活性的蛋白质；
·易于培养和灭菌；
·简单的基因技术；
·安全的宿主菌。
使用本系统，不论是哪种基因起源(细菌，古细菌，真核生物)，各种蛋白质(酶，抗原和细胞因子)都获得了高水平的表达。尤其是真核起源的分泌型蛋白质一般具有S-S键结构，本系统也能进行具有活性的表达，这是使用其他原核表达系统都很难做到的。
构建表达载体时，可以是E.coli 的穿梭载体，也可以是直接将DNA连接液转化到表达宿主中。然后目的蛋白质可通过转化后宿主菌的培养，收集培养上清液获得。不需要细菌匀浆破碎的过程，离心(去除菌细胞)后取上清，然后使用常规技术进行蛋白质的纯化。
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| ■ 表达载体的选择 |
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pNY326能够在B. choshinensis 细胞中复制，它的大小(3.4 kb)比pNCMO2(5.2 kb)小得多，且启动子活性也比pNCMO2弱。这样，即便是表达对宿主细胞有毒性的蛋白质，pNY326也能保持稳定，在某些情况下，也由于转化株的稳定生长可以获得高产量的蛋白质。稳定的产量使得pNY326尤其适合大规模培养。使用B.choshinensis 宿主可一步构建表达质粒，要保证足够高的转化效率，建议使用Brevibacillus Competent Cells (105 transformants/μg DNA; Code No.: HB116)。
pNCMO2是Brevibacillus 和E. coli 间的穿梭质粒。在E. coli 中构建表达质粒后，转入Brevibacillus 进行蛋白质表达。
宿主菌细胞壁蛋白质的P2启动子作为pNCMO2的表达启动子，由于P2启动子在E. coli 中不起作用，有利于克隆目的基因；但在Brevibacillus 中则是呈指数级别的强启动子，可有效生产蛋白质。
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| ■ 融合His标签的表达载体的选择 |
pNC-HisT、pNC-HisF、pNC-HisE是Brevibacillus 和E. coli 间的穿梭质粒。在E. coli 中构建表达质粒后，转入Brevibacillus 进行蛋白质表达。
宿主菌细胞壁蛋白质的P2启动子作为pNCMO2的表达启动子，由于P2启动子在E.coli 中不起作用，有利于克隆目的基因；但在Brevibacillus 中则是呈指数级别的强启动子，可有效生产蛋白质。
pNC-HisT的His-Tag位于分泌信号肽和Thrombin切割位点的中间，pNC-HisF的His-Tag位于分泌信号肽和Factor Xa切割位点的中间， pNC-HisE的His-Tag位于分泌信号肽和肠激酶切割位点的中间，以便His-Tag可以从融合表达蛋白质中去除。 |
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