| Capturem™ Pepsin | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 635728 | Capturem™ Pepsin | 20 Rxns | ￥3,060 |  |
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| ■ 产品简介 |
| 蛋白质质谱分析前的样品消化步骤，通常需要4个小时甚至过夜，如果使用Capturem™ Trypsin 或 Capturem™ Pepsin，可在室温下快速，高效和完全的消化蛋白质，从而使蛋白质组学分析流程更加连贯。这两款产品是一次性小型离心柱的形式，应用新型膜技术，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），在短短几分钟内即可高效、完全地酶解蛋白质样品，与传统的溶液法过夜处理相比，时间更短、效率更高、重复性更好、胰蛋白酶自溶片段更少，避免发生过度消化。 |
| ■ 快速、简单的操作流程 |
| Capturem™ Trypsin 和 Capturem™ Pepsin包含小型离心柱和活化buffer，操作流程简单、快速，只需要加入200 μl活化buffer离心1 min，然后加入蛋白质样品再离心1 min，即可洗脱获得可用于下游分析的肽段。 |
| ■ 产品特点 |
| ·操作快速，2 min-3 min内即可酶解蛋白质样品，无需过夜处理 ·比溶液法效率更高，酶解更彻底 ·样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低 ·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定 |
| ■ 应用 |
| ·蛋白质鉴定 ·蛋白质组学分析 ·质谱样品制备 ·抗体鉴定 |
| ■ 实验例 |
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| 使用Capturem™ Trypsin对BT474全细胞裂解液进行酶解消化并做蛋白质组学分析。通过RP-HPLC将裂解液分成19个独立的组分（图A），然后再使用Capturem™ Trypsin对每个组分单独酶解，并使用LC/MS-MS分析，每个组分中带有2个或以上的特异性肽段的蛋白质总数被鉴定并绘制出，如B图所示。 |
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| 使用Capturem™ Trypsin可以实现快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上图为使用RP-HPLC分析Capturem™ Trypsin和常规溶液法酶解蛋白质的结果，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem™ Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem™ Trypsin酶解的非常彻底。 |
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| 使用Capturem™ Trypsin可以酶解紧密折叠的蛋白质Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC对Capturem™ Trypsin和常规溶液法酶解的产物进行分析，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem™ Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem™ Trypsin可以快速有效地酶解紧密折叠的蛋白质。 |
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| Capturem™ Pepsin的操作流程。在酶消化之前，抗体样品被变性和还原。使用附带的活化buffer初次活化柱子后，将还原处理后的抗体样品溶液（50-800 μl）加入离心柱中，离心1分钟。 在这个过程中，柱上发生胃蛋白酶消化，随后再一次离心洗脱即可获得肽片段，加入NaOH中和洗脱的肽片段，即可用于下游分析。 |
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| 使用Capturem™ Pepsin消化不同的小鼠抗体同种型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取 100 μg，使用TCEP和醋酸于75℃处理15 min进行变性操作，然后用5%甲酸buffer稀释。使用Capturem™ Pepsin对稀释的样品进行消化，通过SDS-PAGE对消化和未消化的样品（各取4 μg）进行检测，如上图所示。 |
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| 不同批次的Capturem™ Pepsin消化产物HPLC图谱比较。使用5%的甲酸稀释50 μg的Apo，选择3个不同批次的Capturem™ Pepsin对其进行消化，HPLC结果显示三组消化产物具有相同的片段，说明Capturem™ Pepsin具有良好的重复性。 |
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| Capturem™ Pepsin与pepsin溶液法消化结果比较。对50 μg 的anti-HER2单克隆抗体使用3种方法进行消化，分别是Capturem™ Pepsin，pepsin溶液法孵育4小时，pepsin溶液法孵育过夜。然后进行质谱分析。由上图可以看出，使用溶液法的消化产物峰左移并且总体峰的数量较多，说明产生了过度消化，而使用Capturem™ Pepsin则没有这个问题。 |
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