AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)酶试剂盒Takara

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AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6666 AAVpro® Purification Kit Maxi(All Serotypes) 4 preps ￥6,134 AAVpro® Purification Kit (All Serotypes) AAVpro® Purification Kit (All Serotypes) AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
Takara 6675 AAVpro® Purification Kit Midi (All Serotypes) 4 preps ￥2,630 AAVpro® Purification Kit (All Serotypes) AAVpro® Purification Kit (All Serotypes) AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
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■ 制品内容
  Code No. 6666 Code No. 6675
AAV Extraction Solution A plus 22 ml × 2 4.4 ml × 2
AAV Extraction Solution B 4.5 ml 0.9 ml
Precipitator A* 5 ml 1 ml
Precipitator B 2.5 ml 0.5 ml
Millex-HV 0.45 μm 4 4
Amicon Ultra-15或-4, 100 kDa 4 4
Suspension Buffer 60 ml × 2 12 ml×2
Cryonase Cold-active Nuclease 500 μl 100 μl
*：Precipitator A 低温保存时会产生白色沉淀物，不影响制品的品质和性能。产生沉淀时，37℃水浴中加热使其完全溶解后再使用。
 
Limited Use Label License: [M88]
 
■ 制品说明
腺相关病毒载体（AAV载体）能够将基因导入至增殖细胞和非增殖细胞中，尤其在非分裂细胞中可以实现长期表达。此外，由于它具有低免疫原性，适用于动物个体基因导入。当使用AAV载体进行动物个体基因导入时，使用高纯度的病毒粒子是很有必要的，需要去除源自病毒包装细胞和培养基的杂质。将基因导入至培养细胞时，使用纯化后的AAV粒子可以消除杂质所带来的影响。
AAV粒子的纯化通常使用CsCl密度梯度超速离心法或碘克沙醇超速离心法，但这两种方法不仅需要熟练的操作手法，同时还存在耗时长和回收率低等问题。
AAVpro Purification Kit (All Serotypes)可以在大约4个小时内简便有效地从AAV粒子制备细胞中纯化出AAV粒子，适用于各种血清型（Serotype）。该试剂盒使用了特别的AAV粒子提取方法，省去了冻融和超声破碎等繁琐操作；特别的AAV载体纯化方法，通过简单的操作即可有效去除杂质。AAVpro Purification Kit Maxi（All Serotypes）用于从5个T225培养瓶的包装细胞中纯化AAV粒子，AAVpro Purification Kit Midi（All Serotypes）用于从1个T225培养瓶的包装细胞中纯化AAV粒子，两个试剂盒所包含的缓冲液和浓缩柱均为4次纯化用量。
 
随着AAVpro Purification Kit Midi（All Serotypes）（Code No. 6675）的发布，我们变更了原AAVpro Purification Kit（All Serotypes）（Code No. 6666）的产品名称。从批次Lot No. AK21409A和Lot No. AK21411A开始，Code No. 6666的产品名称将由AAVpro Purification Kit（All Serotypes）更改为AAVpro Purification Kit Maxi（All Serotypes）。除了产品名称之外，该试剂盒的性能、组分、价格、包装量、操作步骤等都没有发生变更。
 
■ 保存
Cryonase Cold-active Nuclease：－20℃
其他组份：室温
 
■ 特点
· 适用于各种AAV血清型。
· 高纯度、高回收率。
· 特别的AAV载体提取方法，省去了冻融和超声破碎等繁琐操作。
· 特别的AAV载体纯化方法，通过简单的操作即可有效去除杂质。
· 无需进行超离心等繁琐操作。
· 附带从病毒包装细胞中纯化AAV粒子所必需的所有试剂。
 
■ 实验操作流程图
AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
使用AAVpro Purification Kit （All Serotypes） 纯化AAV粒子的操作概略图
 
■ 实验例
AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
图1. 使用AAVpro Purification Kit Maxi (All Serotypes)纯化不同血清型AAV粒子，测定其纯度。制备携带绿色荧光蛋白质ZsGreen1的不同血清型AAV病毒粒子，每种血清型病毒粒子均以5个T225培养瓶培养的包装细胞进行制备。使用该试剂盒分别进行纯化，之后使用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2（Code No. 6233）测定病毒滴度，并以1×109 vector genomes/泳道进行SDS-PAGE。SDS-PAGE结果显示，对于本次检测的所有血清型病毒粒子，观察到的主要条带均为AAV衣壳蛋白质（VP1，VP2和VP3）。
 
AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
图2. 使用AAVpro Purification Kit Maxi (All Serotypes) 纯化不同血清型AAV粒子，评估其感染能力。不同血清型AAV粒子纯化后，感染不同细胞类型，评估其感染性。将纯化后携带绿色荧光蛋白质ZsGreen1的AAV粒子，以5,000 vector genomes/细胞（1、2、3、6型血清型）或50,000 vector genomes/细胞（5型血清型）分别感染CHO、RD、HT1080细胞，感染3天后使用流式细胞仪进行分析。结果表明，使用该试剂盒纯化的AAV粒子能够成功感染本次测试的细胞类型。