高滴度慢病毒包装系统酶试剂盒Takara

发表于2024年8月11日由Amresco中国官网

高滴度慢病毒包装系统
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	631275	Lenti-X™ Packaging Single Shots (VSV-G)	16 Rxns	￥10,183
Clontech	631276	Lenti-X™ Packaging Single Shots (VSV-G)	96 Rxns	￥24,957
Clontech	631277	Lenti-X™ Packaging Single Shots (Integrase Deficient)	16 Rxns	￥10,406
Clontech	631278	Lenti-X™ Packaging Single Shots (Ecotropic)	16 Rxns	￥10,406
Clontech	631282	Lenti-X™ Packaging Single Shots (96-well, VSV-G)	4 × 96-well plates	￥11,849

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高滴度慢病毒包装系统

Lenti-X Packaging Single Shots是第四代慢病毒包装系统，它通过非常简便、操作一致的一步法来制备高滴度慢病毒。通常情况下，VSV-G型慢病毒滴度可达到107-108 IFU/ml。Lenti-X Packaging Single Shots由单管形式的Xfect Transfection Reagent和经过配比优化的Lenti-X包装质粒组成，两者预混后经过预分装和冻干处理，所以无需额外的转染试剂。只需要将这种混合物与您选择的慢病毒载体在无菌水中重新配制，然后将其添加到10厘米培养皿或者96孔培养板培养的293T细胞中，例如Lenti-X 293T Cells（Code No. 632180）即可制备高滴度病毒。

我们提供以下三种类型的Lenti-X Packaging Single Shots，这些包装系统针对不同的嗜性和整合特征进行了优化。每管中试剂和载体的量，都是以在10厘米培养皿或者96孔培养板中制备慢病毒来进行优化的。转染过程完全可以在血清存在的情况下进行，使用不含四环素的FBS，对于使用该技术获得高病毒滴度是很关键的。

· Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)在三款产品中提供最高的病毒滴度（107-108 IFU/ml）和最广的病毒嗜性 · Lenti-X Packaging Single Shots (Ecotropic)病毒嗜性限于小鼠和大鼠来源细胞 · Lenti-X Packaging Single Shots (Integrase Deficient)制备整合能力显著降低的VSV-G假型慢病毒

■ 应用

· 慢病毒可以转导广泛的难转染细胞类型 · 轻松构建稳转细胞系 · 制备VSV-G假型，单嗜型或整合酶缺陷型慢病毒

■ 观看视频

了解我们的第四代包装系统如何可以产生如此高的病毒滴度。

了解使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 如何轻松始终如一地获得高滴度慢病毒。

■ 实验例

图1. 高效一致的转染可制备出高滴度病毒。在四个独立实验中，按照Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 操作流程包装含有ZsGreen1基因的慢病毒载体。简而言之，在四个Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 中，每一个都添加7 μg pLVX-ZsGreen1质粒；每管涡旋振荡20秒并在室温下孵育10分钟。然后，将混合物添加至汇合度约为80％的培养Lenti-X 293T cells中。转染后48小时，通过荧光显微镜（Panel A，顶部）和光学显微镜（Panel A，底部）拍摄图像。拍摄图像后，收集培养上清液，感染HT1080细胞并进行滴度测定（Panel B，IFU/ml）。

图2. 无论是哪种慢病毒载体骨架，使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 都可以制备出高滴度病毒。将CMV ZsGreen1表达框克隆到多个慢病毒载体骨架中，然后按照操作指导使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 将这些载体包装成为慢病毒。在四个Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 中，每一个都添加7 μg pLVX-ZsGreen1质粒；每管涡旋振荡20秒并在室温下孵育10分钟。然后，将混合物添加至汇合度约为80％的培养Lenti-X 293T cells中。转染后48小时，通过多种方法测定病毒滴度。为了确定感染性，收集上清液并感染HT1080细胞（流式细胞术）。收集的病毒上清液也通过RT-PCR方法定量病毒基因组拷贝数（qRT-PCR，Lenti-X qRT-PCR Titration Kit），ELISA方法测定p24（p24 ELISA，Lenti-X p24 Rapid Titer Kit），或者通过一种快速检测方法（Lenti-X GoStix）测定滴度。

图3. 第四代和第三代慢病毒包装系统比较。我们的Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 使用的是5个独立组件组成的包装系统(Panel A)，这5个组件按照特别比例混合，优化了病毒包装性能。gag，pol和env基因的分离有效地降低了RCL产生的概率（Wu et al., 2000）。Tet-Off和Tat反式激活因子驱动病毒必需成分高水平表达，诱导级联表达反应，从而可以制备出高滴度慢病毒。pol基因与vpr 基因的融合可以确保反转录酶/整合酶蛋白质能够转运到重组慢病毒颗粒中。本示意图没有显示所有的载体元件。而第三代慢病毒包装系统（Panel B）不包含分离的gag和pol序列，也没有使用反式激活级联机制，所以产生的病毒滴度较低。

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