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| 由于产品升级，从即日起，您订购的以上产品中的组分In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639648)将陆续替换为性能更高的In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code No. 638947)，该组分数量保持不变，请以实际收到的产品为准。如需含HD组分的旧版说明书或产品组分列表文件，请邮件联络zhukx@takarabiomed.com.cn |
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| 基因编辑后基因组序列确认 |
| Guide-it™ Indel Identification Kit |
· 确认细胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、锌指核酸酶进行基因编辑后导入的突变位点基因序列
· 直接PCR与In-Fusion基因克隆技术相结合，以细胞裂解液为起始简便、快速且准确地获得目的克隆
· In-Fusion基因克隆技术无需连接过程，仅需15分钟即可实现无缝定向克隆
· 包含目的基因扩增、克隆、制备测序用样品所需的全部试剂的完整试剂盒
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| ■ 产品说明 |
| Guide-it Indel Identification Kit用于确认细胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、锌指核酸酶进行基因编辑后所导入的序列插入和缺失(indels)，本试剂盒可以提供完整的操作流程。
本试剂盒包含了目的基因扩增、克隆、制备测序用样品所需的全部试剂。Terra PCR Direct polymerase可直接以粗提细胞裂解液为样品扩增包含靶位点的基因组DNA片段。采用In-Fusion基因克隆技术可将扩增获得的目的基因片段直接克隆至预线性化pUC19载体中，而无需经过限制性酶切处理。将重组质粒转化至Stellar感受态细胞，通过菌落PCR扩增靶标区域。分析PCR产物的DNA序列确认突变位点序列。
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| 图1．实验流程 |
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| Step1 |
Guide-it Indel Identification Kit用于确认细胞群中经过基因编辑后所导入的序列插入和缺失(indels)，本试剂盒可以提供完整的操作流程。本试剂盒所采用的PCR酶可以直接以粗提细胞裂解液为起始扩增基因组DNA片段（约500-700 bp）
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| Step2 |
扩增产物是来自于所有细胞包含基因编辑靶标位点的基因组片段的集合。采用In-Fusion基因克隆技术可将扩增产物直接克隆至预线性化pUC19载体中。
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| Step3 |
将重组质粒转化至经过优化的大肠杆菌菌株，通过菌落PCR扩增靶标区域
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| Step4 |
通过DNA测序分析确认突变位点序列
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图2．CRISPR/Cas9基因编辑后，确认CD81基因插入、缺失序列
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转染表达Cas9和作用于CD81基因的sgRNA至Hela细胞进行基因编辑，采用Guide-it Indel Identification Kit制备CD81基因靶位点测序用样品。选择6个克隆进行测序并将测序数据与野生型基因序列进行比对，确认CD81基因导入的突变位点序列。
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| ■ 产品组分 |
· Guide-it Indel Identification Components
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Terra PCR Direct Polymerase Mix |
110 μl |
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2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP) |
1 ml×3 |
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Extraction Buffer 1 |
400 μl |
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Extraction Buffer 2 |
40 μl |
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pUC19 Cloning Vector, linearized (50 ng/μl) |
10 μl |
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Colony PCR Forward Primer (15 μM) |
200 μl |
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Colony PCR Reverse Primer (15 μM) |
200 μl |
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PCR-Grade Water |
1 ml×6 |
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· In-Fusion Snap Assembly Master Mix
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· NucleoSpin Gel and PCR Clean-up
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· Stellar Competent Cells（Code No. 636763）
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| ■ 保存 |
| Guide-it Indel Identification |
－20℃ |
| In-Fusion Snap Assembly Master Mix |
－20℃ |
| NucleoSpin Gel and PCR Clean-up |
室温 |
| Stellar Competent Cells |
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| Stellar Competent Cells ： |
－70℃ |
| 其它组份： |
－20℃ |
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产品详情请点击： |
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