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| 注意：购买以上产品，需要填写专利确认书 |
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| CRISPR/Cas9质粒系统 |
| 对于使用CRISPR/Cas9 技术进行哺乳动物基因组编辑来说，Guide-it CRISPR/Cas9 系统是可以用于克隆和表达靶向单链向导RNA (single guide RNAs, sgRNAs)的试剂盒。该系统中的载体同时表达Cas9核酸酶、针对特定位点的sgRNA和明亮的荧光蛋白质。其中两种荧光蛋白质（ZsGreen1 和 tdTomato）可供选择，用于监测转染效率或在后期使用流式细胞仪富集/分选转染细胞时用到。使用该系统构建一个表达特异性序列的sgRNA的质粒非常简单；将用户提供的、与目标序列对应的两条核酸单链退火结合成为双链，再使用系统中包含的高效率连接混合液将双链插入到线性化的质粒中。这个试剂盒同样包括Stellar感受态细胞，确保高效率的转化。 |
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| 产品特点： |
· 单质粒载体：特异性靶向sgRNA的表达由人的U6启动子驱动，Cas9核酸酶及明亮的荧光标志(ZsGreen1 或 tdTomato)的表达由一个双向CMV启动子驱动。
· 荧光蛋白质tdTomato和ZsGreen1异常明亮：分别是EGFP亮度的6倍和2.5倍；这些标志物可以被用于监测转染效率、或使用流式细胞仪富集/分选转染细胞。
· 简便地构建质粒：针对您的靶序列设计的特异性寡核苷酸，然后使用试剂盒中提供的高效率混合液和高效的感受态细胞克隆到预先线性化的质粒中。
· 包含足够的试剂：足够用于构建表达10种不同的sgRNA的质粒。
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| 产品应用： |
| 使用CRISPR/Cas9技术对哺乳动物进行基因编辑时，靶向单链向导RNA（sgRNA）的克隆和表达。 |
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| 产品组份： |
Guide-it CRISPR/Cas9 System (Green) (Code No. 632601)
· pGuide-it-ZsGreen1 Vector (Linear)
· Guide-it Ligation Components
· Stellar Competent Cells
Guide-it CRISPR/Cas9 System (Red) (Code No. 632602)
· pGuide-it-tdTomato Vector (Linear)
· Guide-it Ligation Components
· Stellar Competent Cells
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| 实验例： |
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分别接种1×105个HEK293、HeLa、U2OS、HT1080细胞至12孔板，培养16 h后，采用Xfect Transfection Reagent转染2.5 μg pGuide-it-ZsGreen1质粒至细胞。pGuide-it-ZsGreen1质粒包含分别以CCR5、C4BPB、EMX1为靶基因设计的sgRNA。
转染48 h后，通过荧光显微镜观察ZsGreen1荧光表达情况（A），通过FACS测定转染效率（B. Transfection%）。
采用Guide-it Mutation Detection Kit测定基因突变导入效率。以细胞为起始直接PCR扩增目的片段，扩增产物经过变性及退火后产生错配位点，之后Guide-it解离酶剪切错配位点。剪切产物经过凝胶电泳后，通过密度分析测定基因突变导入效率（B. Indel%）。
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| （数据来源于Takara Bio USA, Inc.） |
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