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| ■ 制品内容 (30次量)*1 |
| 1. Terminal Transferase Buffer |
390 μl |
| 2. Terminal Transferase |
30 μl |
| 3. dATP |
150 μl |
| 4. Recombinant RNase Inhibitor |
30 μl |
| 5. Oligo dT Primer*2 |
150 μl |
| 6. RT Buffer |
270 μl |
| 7. RT Enzyme Mix |
30 μl |
| 8. Universal Primer (10 μM) |
120 μl |
| 9. EASY Dilution (for Real Time PCR) |
1 ml |
| 10. Control siRNA (20 nM) |
10 μl |
| 11. Control Primer (10 μM) |
20 μl |
*1 含 poly dA 加尾反应及反转录反应 30 次反应量、Real Time PCR用Universal Primer 120 次反应量。
*2 本制品专用Oligo dT Primer。 |
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| Limited Use Label License: [M81] |
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| ■ 保存 |
| -20℃。 |
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| ■ 制品说明 |
在动物或细胞中siRNA对特定基因敲除效果的验证，在医药领域被广泛应用。
本制品是对合成siRNA进行定量的试剂盒，通过Real Time PCR解析方法，对细胞、组织、血液等提取的Total RNA样品中siRNA的残余量进行测定。
siRNA化学合成时一般在3’末端带有两个脱氧胸腺嘧啶(dT)碱基。本试剂盒在3’末端(dT)加上poly(A)尾，再利用特别设计的Oligo dT Primer进行反转录反应，即使在Total RNA存在的条件下也能制备与siRNA互补的cDNA。以合成的cDNA为模板，利用TB Green® Premix Ex Taq Ⅱ (Tli RNaseH Plus)等试剂盒中的嵌合法进行Real Time PCR，对合成的siRNA进行高灵敏度的定量。
注意：1. 本试剂盒应用于3’末端带有脱氧胸腺嘧啶d(TT)的siRNA的定量。
2. 合成的siRNA 3’末端两个(dT)碱基以外带有DNA序列时，可以通过更改Oligo dT Primer序列，使用本试剂盒。
3. 合成的siRNA 3’末端没有添加(dT)碱基或者3’末端为RNA时，不能使用本试剂盒。 |
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| ■ 实验例 |
| 小鼠血液中合成siRNA的定量模拟实验 |
| 【 方法 】 |
在50 μl小鼠全血(柠檬酸钠抗凝剂)中分别添加10 amol、1 fmol、100 fmol的Control siRNA后，使用RNAiso Plus(Code No.: 9108)及Dr. GenTLE Precipitation Carrier(Code No.: 9094)制备Total RNA(50 μl)。
使用本制品和TB Green Premix Ex Taq II (Perfect Real Time) 进行Real Time PCR反应，对Control siRNA进行定量检测。
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| 【 结果 】 |
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| 使用本制品，通过Real Time PCR解析方法，对于添加到小鼠血液中的siRNA进行了定量。 |
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| 图. 小鼠血液样品中掺入的Control siRNA定量结果 |
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