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| ■ 制品内容 (50 次量) |
| PCR Premix* |
500 μl × 3 支 |
| PCR primers: |
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| Forward primer (20 pmol/μl) |
30 μl × 1 支 |
| Reverse primer1 (20 pmol/μl) |
30 μl × 1 支 |
| Reverse primer2 (20 pmol/μl) |
30 μl × 1 支 |
| Seq primers: |
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| Seq forward (10 pmol/μl) |
20 μl × 1 支 |
| Seq internal (10 pmol/μl) |
20 μl × 1 支 |
| Seq reverse (10 pmol/μl) |
20 μl × 1 支 |
| Positive Control DNA (1 ng/μl ) |
10 μl × 1 支 |
| 16S-free H2O |
1 ml × 3 支 |
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| * PCR Premix中含有TaKaRa Ex Taq、反应用Buffer、dNTP Mixture等，应尽量避免反复冻融。 |
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| ■ 制品说明 |
本试剂盒是PCR扩增细菌16S rDNA的试剂盒，通过进一步对PCR扩增的DNA片段进行序列分析，可以鉴定被检测细菌的种类。细菌的rRNA是细胞内含量最多的RNA，约占RNA总量的80%以上，其分子量大，种类多，由高度保守区和可变区组成。细菌的rRNA包括5S、16S、23S，其中5S rRNA信息量少，不适合分析。23S rRNA尽管分子大，信息量多，但碱基突变速度较快，同样不适用于细菌鉴定。相比之下16S rRNA的遗传较为稳定，长度在1,550±200 bp左右，代表信息量适中，是研究系统进化的好材料。目前已经报道了10,000种以上的细菌16S rDNA序列。通过对16S rDNA的序列分析，可以将细菌划分到属或种。
16S rDNA可以通过PCR法扩增获得，由于16S rDNA的两端较为保守，可以在这段保守区域设计引物，扩增鉴定细菌的16S rRNA基因，然后进行DNA测序，再将其DNA序列与GenBank中的已知序列进行同源性比较后，可以判定检测细菌的种类。
本试剂盒中包含了进行细菌16S rDNA PCR扩增的所有试剂，同时还提供了三条测序用引物(正向测序引物Seq forward、反向测序引物Seq reverse、中间测序引物Seq internal)。PCR扩增引物可以扩增细菌16S rDNA前500 bp的DNA片段(Forward primer/ Reverse primer1)，以及全序列的DNA片段(Forward primer/ Reverse primer2)。16S rDNA的前500 bp 序列变化较大，包含有丰富的细菌种属的特异性信息，进行DNA测序时一个测序反应即可测通，是一种较为经济便捷的16S rDNA鉴定方法；如果前500 bp序列不足以反映细菌的种属信息时，则可以进行16S rDNA的全序列PCR扩增及DNA测序，得到较为全面的16S rDNA序列信息。
对于难以培养、生化反应不明显及传统表型方法不能鉴定的细菌，使用本试剂盒鉴定未知细菌种类尤为方便。
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| ■ 保存 |
| -20℃保存，使用时请于冰中融化。 |
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| ■ 注意事项 |
1. 操作注意。
① 本实验所使用的试剂极易污染，实验尽可能在超净工作台中进行。
② 实验人员应穿无细菌污染的实验服，戴口罩和手套，预先用70%乙醇对实验器具进行消毒等。
③ 实验应使用专用的仪器和耗材，例如：专用的微量移液器及配套的枪头。开启Microtube要小心，防止污染等。
2. PCR Premix 的使用方法。
PCR Premix中含有TaKaRa Ex Taq，应尽量避免反复冻融。
3. 实验用细菌应为纯菌，以确保实验的可信度。 |
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