本制品是使用Illumina公司MiSeq对细菌丛16S rRNA进行解析时使用的PCR扩增试剂盒。以细菌16S rRNA基因的V3-V4区域为对象，使用对多样序列能有效扩增的PCR酶Tks Gflex™ DNA Polymerase进行扩增。
引物是采用设计在常用的高效扩增区域（V3-V4）上的341F、806R（见图1），在引物的5’端连有Illumina MiSeq用的overhang序列。使用本试剂盒扩增得到PCR产物后，利用Nextera XT Index Kit (Illumina公司)制备MiSeq用文库。Nextera XT Index Kit中的引物能够在待测文库的两端接入测序用adaptor和用于区分各个被检测样品的Index序列（见图2）。
|
 |
| |
 |
| |
| ■ 保存 |
| -20℃ |
| |
| ■ 试剂盒以外需要准备的其他试剂、仪器等（主要用品） |
· 核酸提取Kit
【粪便样品】
NucleoSpin DNA Stool (Code No. 740472.10/.50)等
【土壤样品】
NucleoSpin Soil (Code No. 740780.10/.50/.250)等 |
· PCR产物的纯化
Agencourt AMPure XP（Beckman Coulter公司，Code No. A63880/A63881/A63882）
0.2 ml磁力架：Magnetic Separator-PCR Strip（Code No. 635011）等
新配的80% 乙醇
溶出液（10 mM Tris-HCl, pH8.5） |
· 测序adaptor与Index序列的添加
Nextera XT Index Kit（Illumina Code No. FC-131-1001/FC-131-1002）
Nextera XT Index Kit v2 set A-D（Illumina Code No. FC-131-2001～2004)
|
· PCR仪
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice™ Touch（Code No. TP350）
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice™ Gradient（Code No. TP600）等 |
· 凝胶电泳装置
Mupid-2plus（Code No. M-2P）
Mupid-exU（Code No. EXU-1）等 |
· 凝胶
Agarose L03「TAKARA」（Code No. 5003/5003B）
PrimeGel™ Agarose PCR-Sieve（Code No. 5810A）等 |
| · 微量高速离心机 |
| · 微量移液器及Tip |
| |
