CycleavePCR™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0酶试剂盒Takara

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CycleavePCR™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0
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Takara CY205 CycleavePCR™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0 50 Rxns ￥2,003 CycleavePCR™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0 CycleavePCR™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0 CycleavePCR™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0
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■ 制品内容 (25 μl × 50次量)
2X Cycleave Reaction Mixture (2X conc.)
 625 μl
SIN Primer/Probe Mix (FAM、ROX标记) (5X conc.)*
 250 μl
dH2O 1 ml
SIN Positive Control
150 μl (30次反应量)
   
* 含荧光标记探针，应避光保存。引物由SHIMADZU CORPORATION生产制造。
 
Limited Use Label License: [M40], [M46], [L4]
 
■ 制品说明
沙门氏菌 (Salmonella) 是与E.Coil 和Shigella同属于一群的重要肠道致病菌，这一类细菌在自然界中分布很广，其中有2,500多种被确认为血清型。近年来由于Salmonella Enteritidis引起的食物中毒急剧增加。
本制品是对大部分沙门氏菌都具有的基因－侵袭蛋白A (invasion protein A，invA) 基因进行快速、准确检出的Real Time PCR试剂盒。在PCR反应中每个循环包括三个过程：模板变性、引物退火、聚合酶作用下的延伸，该反应可以实现目的基因的指数倍扩增，使用Real Time PCR可实时监测扩增过程。 制品中使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可防止在循环反应前因引物错配、引物二聚体所产生的非特异性扩增。
该检测使用了Cycling Probe法。Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
制品中检测沙门氏菌invA基因的探针荧光物质使用了FAM标记，内参照检测用探针的荧光物质使用了ROX标记，在同一反应管内对沙门氏菌invA基因及内参照 (Internal Control) 同时进行扩增，通过两种不同荧光标记探针可以对invA基因和内参基因同时检定，实现双通道同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果的产生。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高、特异性强。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项
1. Real Time PCR仪的使用请按照说明书进行。
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确进行检测。实验者的汗液和唾液也会带入核酸酶，操作时应注意。
3. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离。
  区域1：反应液的配制及分装。
区域2：检测样品的制备。
区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。
由于本制品使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从Tube管中取出扩增产物。
4. 使用本制品获得的结果是以Real Time PCR仪的分析为基础来判定的。如果Real Time PCR仪的任一功能出现问题都可能导致错误的判定结果，因此，要依据仪器说明书来正确设置Real Time PCR仪。