未分化人ES/iPS细胞检测试剂

仅需添加培养液便可检出人ES/iPS细胞！

荧光标记rBC2LCN（AiLecS1）

◆rBC2LCN（AiLecS1）

　　rBC2LCN（AiLecS1）是在伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cenocepacia）来源凝集素BC2L-C的N末端域表达的重组凝集素。

　　由于rBC2LCN对存在于人ES/iPS细胞表面的足糖萼蛋白（Podocalyxin）上的粘蛋白样O-型糖链的H型3（Fucα1-2Galβ1-3GalNAc）具有高亲和力，因此可用作人ES/iPS细胞的未分化标志物。

　　本产品是荧光染色标记，能直接添加到人ES/iPS细胞的培养液中，实现未分化活细胞分析。 适用于未分化细胞检测用标记。可用于细胞染色，流式细胞仪。另外，使用本品持续培养数日已确认细胞无毒性。

　　我们供应绿色荧光标记（FITC），黄色荧光标记（Cy3），红色荧光标记（Cy5）的三种类型的系列商品。

◆特点

●　添加到培养基即可进行染色

●　无需固定细胞，活细胞也可直接进行明显染色

●　细胞毒性低，染色后也可培养

●　识别Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-3, SSEA-4细胞表面存在的糖链

●　可用于细胞染色和流式细胞仪

◆产品概述

●　已进行无菌试验（0.1μm过滤器进行灭菌）

●　PBS(-)溶液

●　使用时稀释比

　  Live Cell Imaging 1：100～1,000
　  Flow Cytometry 1：100～1,000

●　激发波长/发射波长

	Excitation	Emission
rBC2LCN-FITC	495nm	520nm
rBC2LCN-547	551nm	565nm
rBC2LCN-635	634nm	654nm

◆使用方法

细胞染色

活细胞染色（Live Cell Imaging）

1. 准备培养中的人ES/iPS细胞

2. 每1mL的培养基添加1~10μL的荧光标记rBC2LCN

3. 37℃，5％CO₂孵育30分钟。

4. 更换新的培养基或者HBSS(+)。

5. 利用荧光显微镜观察

固定细胞染色

1. 准备培养中的人ES/iPS细胞

2. 除去培养基，用HBSS(+)洗净。

3. 添加4%多聚甲醛（PFA）溶液，室温静置10～20分钟。

4. 除去PFA后，用D-PBS(-)洗净三次。

5. 添加D-PBS(-)。

6. 每1mL的D-PBS(-)添加1～10μL荧光标记rBC2LCN。

7. 37℃，5% CO₂孵育30分钟。

8. 更换D-PBS(-)。

9. 利用荧光显微镜观察。

流式细胞仪

1. 准备培养中的人ES/iPS细胞。

2. 使用细胞分散液，分散成单细胞。

3. 将细胞分散液移至管内，1,000rpm离心3分钟。

4. 除去上清液，用FCM Buffer*重悬细胞，离心后，舍弃上清液。

* FCM Buffer： D-PBS(-)和HBSS(-)含有10mmol/L EDTA，1% BSA

5. 用FCM Buffer重悬出5×10⁶ cells/mL的细胞悬浮液

6. 每1mL细胞悬浮液，添加1～10μL的荧光标记rBC2LCN。

7. 室温，避光静置30分钟。

8. 1,000rpm离心三分钟，除去上清液。

9. 用FCM Buffer重悬细胞，离心后，除去上清液。

10.  适量的FCM Buffer再悬浮细胞。

11.  进行流式细胞术。

使用注意

1. rBC2LCN染色可以维持2~3天。

2. 使用含有血清的培养基可能使信号背景变高

3. 根据流式细胞仪进行细胞分选时，当细胞分散或FCM缓冲液的终浓度到达10μmol/L时，请添加Y-27632。

◆人iPS细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）

●　用rBC2LCN-FITC， rBC2LCN-635以及Hoechst33342对人iPS细胞201B7株进行染色处理。（无细胞固定）

（稀释倍数　1：1,000）

●　用rBC2LCN-FITC，Tra-1-60，Tra-1-81，SSEA-4，对人iPS细胞201B7株进行染色处理。

　  2小时后确认染色图像。（未固定细胞）

（稀释倍数　1：100）       

★　与Tra-1-60, Tra-1-81相比较, rBC2LCN的活细胞染色度更强。

★　即使交换培养基，rBC2LCN染色第二天后染色效果依然明显。

◆人ES细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）

　　使用rBC2LCN-FITC对人ES细胞WA01株进行染色（未细胞固定）。细胞的一部分无法维持未分化状态而进行分化。如果使用rBC2LCN-FITC对活细胞进行染色，以维持未分化状态部分已染色，而已分化部分未染色来进行区分。

＜数据提供 国家研究与发展公司先进工业科学和技术研究院 新药开发的基础研究部门恭子小沼老师，伊藤弦老师＞

◆人iPS细胞固定后染色

　　将人iPS细胞201B7株用多聚甲醛固定后，使用rBC2LCN和DAPI进行细胞染色。

对于人iPS细胞毒性评估

　　向人iPS细胞201B7株的培养液中分别添加其1/1,000、1/100、1/50量的rBC2LCN-FITC，持续培养。其结果是，不存在rBC2LCN-FITC浓度对毒性影响，不同浓度的细胞增殖程度相同程度。

　

　

〔细胞株〕
　人iPS细胞201B7株

〔培养基组成〕
　StemSure^® hPSC培养基Δ+35ng/mL bFGF

〔涂层〕
　Matrigel^® hESC-Qualified Matrix

〔细胞接种数目〕
　4×10⁴cells/well（12孔板）

　使用Flow Cytometry进行人iPS细胞分离

　使用rBC2LCN-FITC及rBC2LCN-6547、rBC2LCN-635对人iPS细胞201B7细胞株和人正常二倍体成纤维细胞染色，进行流式细胞术。

　实验结果：未分化的人iPS细胞与分化的人二倍体成纤维细胞成功分离。

◆产品列表

产品编号	产品名称	等级	容　量
180-02991 186-02993	人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC) rBC2LCN-FITC 【AiLecS1-FITC】   　　Ex. 495nm, Em. 520nm	用于细胞染色	100μL   100μL×5
186-03211 182-03213	人iPS未分化标记染料rBC2LCN-547   (AiLecS1-547) rBC2LCN-547 【AiLecS1-547】   　　Ex. 551nm, Em. 565nm	用于细胞染色	100μL   100μL×5
185-03161 181-03163	人iPS未分化标记染料rBC2LCN-635   (AiLecS1-635)　 rBC2LCN-635 【AiLecS1-635】   　　Ex. 634nm, Em. 654nm	用于细胞染色	100μL   100μL×5

◆相关产品

★rBC2LCN剥离液★

本产品能够将结合在人ES细胞▪ 人iPS细胞表面糖链的rBC2LCN凝集素从细胞里面剥离出来。剥离rBC2LCN之后的细胞能够进行抗体染色，可以继续培养。

产品编号	产品名称	等级	规格
182-03171	rBC2LCN剥离溶液 rBC2LCN Stripping Solution 【AiWashS1】	用于细胞培养	10mL

★BC2LCN凝聚素, 重组体、溶液未标识rBC2LCN系列

产品编号	产品名称	等级	规格
029-18061 025-18063	BC2LCN （AiLecS1）凝集素　 BC2LCN 【AiLecS1】 Lectin, recombinant, Solution	糖链研究用	1mg 1mg×5

★StemSure^® hPSC培养基Δ无饲养层细胞条件下可用于维持培养人多功能干细胞（ES/iPS细胞）的无血清液态培养基。原料不含动物体来源成分。

产品编号	产品名称	等级	规格
197-17571 193-17573	StemSure人多能干细胞培养基 StemSure® hPSC Medium Δ	用于细胞培养	100mL   100mL×4
064-05381 068-05384 060-05383	成纤维细胞生长因子（碱性），人，重组，无动物衍生物 Fibloblast Growth Factor (basic), Human, recpmbonant,   Animalderived-free 【bFGF/FGF2】	細胞生物学用	50μg   100μg   1mg
160-27051	hPSC解离溶液 hPSC Dissociation Solution 　人类iPS細胞用单体细胞分散剂。	用于细胞培养	100mL

★StemSure^® 系列
   已通过小鼠ES细胞D3株品质测验。

产品编号	产品名称	等级	规格
197-16275	StemSure D-MEM（高糖）含酚红和丙酮酸钠 StemSure® D-MEM with   Phenol Red and Sodium Pyruvate	用于细胞培养	500mL
198-15781	StemSure10 mmol/L 2-巯基乙醇 StemSure® 10mmol/L   2-Mercaptoethanol Solution（×100）	用于细胞培养	100mL
195-15791	StemSure50 mmol/L 硫代甘油（×100） StemSure® 50mmol/L   Monothioglycerol Solution（×100）   可与2ME同等使用的还原剂。医药用外不适用。	用于细胞培养	100mL
190-15805	StemSure 0.1w/v%明胶溶液 StemSure® 0.1w/v%   Gelatin Solution	用于细胞培养	500mL
195-16031	StemSure干细胞冻存液 StemSure® Freezing Medium 含有BSA的ES细胞・iPS细胞冻存液	用于细胞培养	100mL
197-17831	StemSure® 人多能细胞冻存液 StemSure® hPSC Freezing Medium, AF 无动物体成分的ES·iPS细胞冻存液	用于细胞培养	100mL
199-16051 195-16053	StemSure® 白细胞抑制因子溶液,小鼠，重组 StemSure® LIF, Mouse,   recombinant, Solution	用于细胞培养	106units   106units×10

●　ES・iPS细胞研究用试剂
　　2007年iPS细胞确立发表后，许多与iPS细胞相关的文献纷纷发表。在各种各样的文献中报道出来的与ES细胞・iPS细胞の未分化能维持和分化诱导相关的低分子化合物也逐渐阵容化。

●　液态培养基・细胞培养用试剂
　　我们有着以液态培养基为首的平衡盐溶液、细胞剥离·分散液、抗生物质溶液、细胞外基质等丰富的产品种类。

参考文献

·   Onuma, Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 431, 524, (2013).

·   Tateno, H., et al.: Stem Cells Transl. Med., 2, 265, (2013).

·   Tateno, H., et al.: Sci. Rep., 4, 4069, (2014).