用于人iPS细胞冻存

StemSure^® hPSC冻存液，AF

 

StemSure^® hPSC冻存液，AF是无动物源成分的人iPS细胞用冻存液。本品含DMSO。

 

◆特点

●　能以高细胞存活率冻存人iPS细胞

●　不含动物源成分

●　可以以缓慢冻结的方式进行冻存

●　可用于无饲养层培养的细胞

●　无需进行繁杂的试剂配制

●　无需程序降温

 

 

 

◆人iPS细胞冻存步骤

冷 冻	1.在除去人iPS细胞培养皿中的培养液，用D-PBS（-）清洗后，用Accutase等分散细胞
	2.添加含有10 µmol/L Y-27632的人iPS细胞用培养基（hPSC培养基（+ROCKi）），用移液器吹散成单细胞
	3.将吹打分散后的细胞悬浮液移至样本管中，离心（1,000rpm，3分钟，室温）后，除去上清液
	4.添加hPSC培养基（+ROCKi），用移液器悬浮
	5.计算细胞数，将样本管离心（1,000rpm，3分钟，室温）后，除去上清液
	6.利用本产品使细胞悬浮成2×106cells/mL，并以500 µL/管进行分装
	7.在-80°C下冷冻后，在-150°C或者-80°的条件下保存（长期保存建议保存在-150°C）
复 苏	1.添加hPSC培养基（+ROCKi）到冻存瓶中，复苏冷冻细胞 （使用温水浴复苏冷冻细胞的情况下，只需要半溶解）
	2.离心（室温下，1,000rpm，3分钟）后，除去上清液，添加hPSC培养基（+ROCKi）,使细胞悬浮
	3.计算细胞数，以2×105cells/6cm的密度在培养皿中铺板

◆人iPS细胞201B7株的冻存

确认细胞存活率和细胞增殖率

将培养中的人iPS细胞201B7株分散成单细胞后，重悬于StemSure^® hPSC冻存液，AF中，在-80°C下冻存2~4天。

确认冷冻复苏后的细胞存活率和细胞增殖率。反复冷冻复苏5次后，确认细胞、细胞集落的形态和各种未分化标记（Oct3/4、Nanog、BC2LCN）的表达。

确认细胞集落的形态

确认细胞存活率和细胞增殖率

结果表明，用StemSure^® hPSC冻存液，AF冻存的人iPS细胞显示出高细胞存活率和细胞增殖率。

另外还确认了各种未分化标记的表达。

 

◆人iPS细胞冻存步骤

使用用StemSure^® hPSC冻存液，AF冷冻复苏5次后的iPS细胞201B7株，形成胚叶体，βⅢ-Tubulin,α-SMA,AFP的表达确认其分化成了三胚叶。

（胚叶体形成，三胚叶分化诱导时的培养基组成）

Stemsure D-MEM+SSR+2mol/L L-Glutamine+10mmol/L2-Mercaptoethanol +1×Non-essential Amino Acids Solution

测试项目：外观，应用试验（iPS细胞201B7株），无菌试验，内毒素，支原体测试

可用于ES干细胞的冻存液，请点击：StemSure细胞冻存液

通用动物细胞冻存液，请点击：CultureSure无血清细胞冻存液