上海金畔生物科技有限公司的离心柱式RNAeasy™小RNA抽提试剂盒(RNAeasy™ Small RNA Isolation Kit with Spin Column)，也称离心柱式miRNA抽提试剂盒(miRNA Isolation Kit with Spin Column)，是一种基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提miRNA等小于200个核苷酸(nucleotide, nt)的小RNA(small RNA)的试剂盒。
      本试剂盒抽提得到的小RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern等常规实验，也可以用于基因芯片分析
(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对小RNA质量要求较高的情况。
      上海金畔生物科技有限公司的三款离心柱式及Trizol法RNA抽提试剂盒的主要特点和差异如下：

      动物组织或细胞中的RNA按照长度可以分为长链RNA(long RNA)和小RNA(small RNA)，长链RNA通常大于200nt(也常被称为总RNA)，而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。
      本试剂盒抽提小RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA，然后在两次高速离心过程中，通过离心柱将不同大小的RNA分离。第一次过柱时，200nt以上的RNA特异性结合到纯化柱上，而200nt以下的小RNA穿柱而过被收集到液体收集管中；第二次过柱时，特定的结合体系使小RNA结合到另一个纯化柱上。然后通过2次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度的小RNA洗脱下来。

图1. 离心柱式小RNA抽提流程示意图

      本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行小RNA分离纯化，不仅能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂，也能有效避免如国外知名的Q品牌等公司使用类似于Trizol的裂解液裂解样品、接着使用氯仿分层、后续再进行柱纯化等涉及的有毒有害有机试剂。
      本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用柱纯化，无需繁琐的RNA沉淀步骤，抽提操作过程仅20-25分钟。相比于传统的Trizol抽提法，本试剂盒能够有效去除大分子RNA，操作流程显著简化，缩短了抽提时间，降低了RNA降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。
      本试剂盒抽提获得的小分子量RNA得率高、纯度好。100万培养动物细胞约能抽提得到1-2μg小RNA，5mg小鼠肝脏组织约能抽提得到1-1.5μg小RNA。A260/A280通常为2.0-2.2。本试剂盒与国际知名T品牌同类产品的抽提效果对比图参见图2。

      图2.本试剂盒与T品牌同类产品的小RNA抽提效果对比。样品为冻存的100万个HeLa细胞、5mg小鼠肝组织和5mg小鼠肾组织。洗脱液用量均为30μl。均取6μl洗脱的样品经变性处理后，在含7M尿素的15% TBE-PAGE中电泳约90分钟后在NA-Red溶液中染色后拍照。上海金畔生物科技有限公司试剂盒抽提产物的A260/A280依次为2.01、2.07和2.06；T品牌试剂盒抽提产物的A260/A280依次为1.93、1.79和1.29。实际抽提效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，本图仅供参考。

      本试剂盒用于抽提18-200 nt小RNA，主要包括5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA (miRNA)，以及short
interfering RNA (siRNA)、piRNA、tsRNA等，能够有效去除基因组DNA和200nt以上的RNA，如28S rRNA、18S rRNA、mRNA等。
      本试剂盒适用于新鲜或冻存的动物组织或细胞样品小RNA的抽提。样品的用量对抽提效果影响较大，样品用量过多会导致在第一次过柱时不能最大程度去除200nt以上的RNA，通常建议培养细胞的用量不超过100万，动物组织的用量不超过5mg。
      本试剂盒可用于50个样品的小RNA抽提。
包装清单：

保存条件：
      室温保存，一年有效。
注意事项：
      对于富含RNase的样品(如动物组织)，建议使用前在裂解液中添加二硫苏糖醇(Dithiothreitol, DTT)至终浓度为40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巯基乙醇至终浓度为1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巯基乙醇)，含DTT或β-巯基乙醇的裂解液可在室温放置1个月。
      本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
      对于操作环境中RNA酶的去除，推荐使用上海金畔生物科技有限公司生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。
      使用冻存的细胞或组织抽提小RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品中的RNA。对于组织样品，推荐使用上海金畔生物科技有限公司生产的RNALater™动物组织RNA稳定保存液(R0118)进行保存以保证样品RNA的完整性。
      本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
      废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
      结合液I、结合液II和洗涤液中含有乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

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