| Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20U/μl) |
| 产品编号: D7095M |
| 产品包装: 2.5KU |
| 产品价格: 998.00元 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7095M | Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20U/μl) | 2.5KU | 998.00元 |
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，简称TdT，中文名称为末端脱氧核糖核酸转移酶，是一种非模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3’羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。有报道TdT也可以在RNA的3’羟基端加上NTP，但对于RNA的催化活性要弱于DNA。
用途：寡核苷酸或DNA 3’羟基末端标记；DNA末端加尾(DNA tailing)；5′-RACE；合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义：37℃ 60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：200mM potassium cacodylate (pH7.2), 1mM CoCl2,0.1mM DTT, 0.01% (v/v) Triton X-100, 10μM
oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。
酶储存溶液：100mM KAc (pH6.8), 2mM 2-mercaptoethanol, 0.01% (v/v) Triton X-100 and 50% (v/v) glycerol。
Reaction Buffer (5X)：0.125M Tris (pH7.2 at 25℃), 1M potassium cacodylate, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5mM
CoCl2。
失活或抑制：70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7095M-1 | TdT (20U/µl) | 125μl |
| D7095M-2 | Reaction Buffer (5X) | 1.5ml |
| － | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明：
1. DNA 3’末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
| 待标记DNA | 10 pmol of 3′-termini |
| Reaction Buffer(5X) | 10μl |
| [α-32P]-ddATP, ～10TBq/mmol(3000Ci/mmol) | 1.85 MBq(50μCi) |
| TdT(20U/μl) | 1-2μl |
| 补充无核酸酶的去离子水 | 至50μl |
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育20分钟。
d. 70℃孵育20分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
说明：标记的效率和3’羟基末端的类型有关，3’突出末端的标记效率要显著高于3’缩进末端或平末端的标记效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：
a. 参考如下表格设置反应体系：
| DNA片断 | 1 pmol of 3′-termini |
| Reaction Buffer(5X) | 4μl |
| dATP or dTTP | 130pmol(20 μCi) |
| 或 dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种) (3000 Ci/mmol) |
60pmol |
| TdT(20U/μl) | 0.5-1.5μl |
| 补充无核酸酶的去离子水 | 至20μl |
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育25分钟。
d. 70℃孵育25分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
说明：在上述反应条件下，每个3’羟基末端可以加上100-130个dA或dT，或20-30个dC或dG。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。
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| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
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